人重组血清白蛋白基因T载体和pET28a表达载体-首都医科大学学报.PDFVIP

2006 年 10 月 　　　　 首 都 医 科 大 学 学 报 　　　Oct . 2006 第 27 卷 　第 5 期 　　　 J o ur nal of Cap it al U niver sit y of Medical Science s Vol . 27 　No . 5 ·基础研究 · 人重组血清白蛋白基因 T 载体和 pET28a 表达 载体的构建及鉴定 1 2 3 4 3 云妙英 　王 　涛 　肖宇红 　张京文 　陈正华 ( 1. 中国科学院西北高原生物研究所 ;2 . 北京大学公共卫生学院;3 . 甘肃亚盛集团博士后工作站 ; 4 . 甘肃农业大学农学院) ( ) 【摘要】　目的　构建重组人血清白蛋白 r H SA 表达基因的克隆载体及表达载体 ,为下一步的蛋白表达和构建 r H SA 融合基因 打下基础 。方法 　从人胎盘中提取总 RN A ,利用 R TPCR 方法构建 cDN AmRN A 杂交链 ,然后用人血清 白蛋白表达基因的特 异引物进行 PCR , PCR 产物回收后与 T 载体连接 ,经过转化 、质粒酶切 、测序等一系列手段对插入情况和序列是否正确进行鉴 定 。用另一组带有酶切位点的引物和 pfu 酶进行 PCR ,用 Eco R Ⅰ和 Hind Ⅲ双酶切 PCR 回收片段及 p E T28a 表达载体 ,二者经 过连接 、转化 、质粒酶切 、测序等手段重新鉴定序列是否正确 。结果 　插入到 T 载体和 p E T28a 载体中的序列为 1 830 bp 的带有 24 个氨基酸信号肽的基因片段 ,此序列和 GenBank 中公布的 r H SA 序列相一致 ,并显示在 485 、750 、1 685 等位点可能有等位基 因多态性 。结论 　从胎盘中提取 mRN A 后 ,利用 R TPCR 构建的人血清 白蛋 白基因序列完全正确 , 为下一步的工作提供了 基础 。 【关键词】　人血清白蛋白基因; 载体 ; 序列鉴定 【中图分类号】　Q 781 Constructing and Sequencing T Vector and pET28a Expression Vector of Human Recombinant Serum Al bumin Gene Yun Miaoyin g1 , Wang Tao2 , Xiao Yuhon g3 , Zhang J in gwen4 , Chen Zhen ghua3 ( 1. N ort hw es t P l ateau I ns ti t ute of B iology , T he Chi nese A ca demy of S ciences ; 2. S chool of P ubl ic H eal t h , Pek i ng Uni vers i ty ; 3. Pos t g ra d uate R esea rch S t ation of Gans u Yas heng Group Co ; 4 . A g ronomy Col leg e , Gans u A g ricul t u ral Uni ve rs i ty) 【ABSTRACT】　Objective 　To con st ruct and sequence T Vector and p E T28a exp ression vector of recombinant Human Serum Albumin (r H SA) for p rot ein exp ression and con st ruction