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项目二、核酸生产任务1、核酸制备方案生物制药1111樊贝贝;目录;核酸知识复习;核酸类药物特性;按其作用特点可分为： (1)抗病毒剂，代表药物有三氮唑核苷、无环鸟苷和6可糖腺苷等，临床上用于抗肝炎病毒、疱疹病毒及其他病毒； (2)抗肿瘤剂，代表药物有用于治疗消化道癌的氟尿嘧啶以及用于治疗各类急性白血病的阿糖胞苷;动物肝脏DNA的提取;原理;将抽提得到的核蛋白用SDS（十二烷基磺酸钠）处理，DNA(或RNA)即与蛋白质分开，可用氯仿一异戊醇将蛋白质沉淀除去，而DNA则溶解于溶液中。向溶液中加入适量乙醇，DNA即析出。 为了防止DNA（或RNA）酶解，提取时加EDTA（ethy-lenediamine tetraceticacid，乙二胺四乙酸）。;器材及试剂;试剂 ①5mol·L-1NaCl溶液：将292.3gNaCl溶于水，稀释至1000ml。 ②0.14mol·L-1NaCl-0.0015mol·L-1EDTA-Na溶液：溶8.18gNaCl及37.2gEDTA-Na于蒸馏水中，稀释至1000ml。 ③25%SDS溶液：溶于25g十二烷磺酸钠于100ml45%乙醇。 ④0.015mol·L-1NaCl-0.0015mol·L-1柠檬酸三钠溶液：氯化钠0.828g及柠檬酸三钠0.341g溶于蒸馏水，稀释至1000ml。 ;⑤氯仿—异戊（丙）醇混合液：氯仿：异戊（丙）醇=24:1（v/v） ⑥1.5mol·L-1NaCl-0.15mol·L-1柠檬酸三钠溶液：氯化钠82.8g及柠檬酸三钠34.1g溶于蒸馏水，稀释至1000ml。 ⑦3mol·L-1乙酸钠-0.001mol·L-1EDTA-Na溶液：称取乙酸钠408g、EDTA-Na0.372g溶于蒸馏水，稀释至1000ml。 ⑧70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、无水乙醇。 ;[抽提] ;具体操作方法;2.向上述沉淀物加入0.14mol·L-1NaCl-0.10mol·L-1EDTA 溶液，使总体积为37ml，然后滴加25%SDS溶液3ml，边加边搅拌。加毕，至60℃水浴保温10分钟（不停搅拌）溶液变得粘稠并略透明，取出冷至室温。此步操作系使核酸与蛋白质分离。 3.加入5mol·L-1NaCl溶液10ml。是NaCl最终浓度达到1mol·L-1，搅拌10分钟，加入月一辈体积的氯仿-异戊（丙）醇混合液，振摇10分钟，静置分层，取上、中两层液离心10分钟（4000r·min-1）。去掉沉淀，上层清液徐徐加入1.5~2倍95%乙醇，DNA沉淀即析出，用玻璃棒顺着一个方向慢慢搅动，则DNA丝状物即缠在玻棒上。;4.将DNA粗品置于27ml0.015mol·L-1NaCl-0.0015mol·L-1柠檬酸三钠溶液中，再加入3ml1.5mol·L-1NaCl-0.15mol·L-1柠檬酸三钠溶液，搅匀，加入一倍体积氯仿-异戊（丙）醇混合液，振摇10分钟，离心（4000r·min-1，10分钟），倾出上层液（沉淀弃去），加入1.5倍体积95%乙醇，DNA即沉淀析出。离心，弃去上清液，沉淀（粗DNA）按本操作步骤重复一次。;5.将上步所得沉淀溶于27ml0.015mol·L-1NaCl-0.0015mol·L-1柠檬酸三钠溶液中，然后以线状徐徐加入2倍95%乙醇，边加边搅，取出丝状DNA，依次用75%、80%、95%及无水乙醇各洗一次，真空干燥。保存待用。;酵母RNA的提取;酵母;器材与试剂;工艺路线;操作步骤;核酸类药物检测;2、RNA含量测定 　（1）定磷法——660nm； 　（2）定糖法——地衣二酚（苔黑酚）法。 　　盐酸水解RNA，使核糖游离出来，并生成糠醛，与地衣二酚反应呈蓝绿色，在670nm处有最大吸收峰。 3、核苷酸、核苷含量的测定——紫外分光光度法 　　它们都有特殊的紫外吸收曲线，选取合适的波长，可以根据其吸收值测定核苷、核苷酸的含量。;