掌叶半夏凝集素蛋白刺激巨噬细胞的致炎作用研究-中国中药杂志.PDFVIP

２０１７年７月 第４２卷第１３期 Ｖｏｌ４２，Ｎｏ１３ Ｊｕｌｙ，２０１７ 掌叶半夏凝集素蛋白刺激巨噬细胞的致炎作用研究 １ １，３，４ １，３，４ １ ２ 毛善虎 ，郁红礼 ，吴皓 ，王卫 ，李晓楠 （１南京中医药大学 药学院，江苏 南京２１００２３； ２南京中医药大学翰林学院药学系，江苏泰州２２５３００； ３江苏省中药炮制重点实验室，江苏 南京２１００２３； ４国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心，江苏 南京２１００２３） ［摘要］　为探索掌叶半夏凝集素蛋白（ＰＰＬ）刺激巨噬细胞诱导炎症的作用与炎症小体ＮＬＲＰ３的相关性。采用凝胶色谱纯化 掌叶半夏凝集素蛋白并采用ＳＤＳＰＡＧＥ凝胶电泳分析其纯度；采用ＥＬＩＳＡ法以ＩＬ１为指标考察ＰＰＬ刺激巨噬细胞释放炎症 β 因子的影响；采用荧光探针 ＤＣＦＨＤＡ荧光酶标仪检测 ＰＰＬ刺激巨噬细胞后活性氧 ＲＯＳ的水平变化；以ＲＯＳ抑制剂 ＮＡＣ （Ｎ乙酰半胱氨酸）预处理巨噬细胞，考察ＰＰＬ刺激ＲＯＳ的过量生成与炎症因子ＩＬ１大量释放的相关性；采用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ β 方法检测ＰＰＬ对炎症小体生成相关的Ｃａｓｐａｓｅ１ｐ２０，ＮＬＲＰ３，ＴＸＮＩＰ，ＡＳＣ等蛋白的表达水平变化。结果显示分离纯化的ＰＰＬ 达到电泳纯；ＰＰＬ刺激巨噬细胞后引起ＲＯＳ过量释放，引起强烈的氧化应激反应，胞内炎症因子ＩＬ１含量显著升高；ＮＡＣ可 β 抑制ＰＰＬ导致的ＲＯＳ过量生成，且ＩＬ１释放也显著降低。同时ＰＰＬ可诱导胞内Ｃａｓｐａｓｅ１ｐ２０，ＮＬＲＰ３，ＡＳＣ蛋白表达升高， β ＴＸＮＩＰ表达显著降低。研究结果表明，ＰＰＬ刺激巨噬细胞可导致强烈的氧化应激反应，同时能够激活炎症小体 ＮＬＲＰ３，导致 ＩＬ１大量生成释放，即ＰＰＬ能够通过ＲＯＳＴＸＮＩＰＮＬＲＰ３ＩＬ１信号通路促进ＩＬ１的成熟和分泌，导致炎症级联反应。 β β β ［关键词］　掌叶半夏；凝集素；炎症；ＲＯＳ；ＮＬＲＰ３；ＩＬ１；ＮＡＣ β ＰｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｌｅｃｔｉｎｆｒｏｍＰｉｎｅｌｌｉａｐｅｄａｔｉｓｅｃｔａ ｏｎｍａｃｒｏｐｈａｇｅ １ １，３，４ １，３，４ １ ２ ＭＡＯＳｈａｎｈｕ，ＹＵＨｏｎｇｌｉ， ，ＷＵＨａｏ ，ＷＡＮＧＷｅｉ，ＬＩＸｉａｏｎａｎ （１ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００２３，Ｃｈｉｎａ； ２ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ＨａｎｌｉｎＣｏｌｌｅｇｅ，ＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｔａｉｚｈｏｕ２２５３００，Ｃｈｉｎａ； ３ＪｉａｎｇｓｕＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００２３，