中国药科大学 分析化学课件 第18经典液相色谱法.pptVIP

第十八章 经典液相色谱法 第一节 概述 液相色谱法：以液体为流动相的色谱法称～。 经典液相色谱：固定相颗粒较大且不均匀 常压下输送流动相 柱效较低 分析周期长 现代液相色谱：固定相颗粒小且均匀 高压下输送流动相 柱效较高 分析周期短 第二节 液-固吸附柱色谱 （一）分离原理 （二）常用吸附剂 （三）吸附剂和流动相的选择 （一）分离原理 各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心 利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的 吸附能力差异而实现分离 （二）常用吸附剂：多孔、微粒状物质 1. 硅胶 2. 氧化铝 3. 聚酰胺 1. 硅胶（SiO2·H2O） 结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构 表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心 表面硅醇基存在形式： 吸附活性的大小顺序是：Ⅲ＞Ⅰ＞Ⅱ 游离羟基Ⅰ 束缚形Ⅱ 活泼形Ⅲ 适用：分析酸性或中性物质 硅胶吸附特性： 1）与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性↑，吸附能力↑，k ↑，tR ↑ 强极性吸附中心，不易洗脱 2）吸水→失活 →105～110OC烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大 →500OC烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力 表18-1 硅胶和氧化铝的含水量与活性的关系 续前 4. 三者关系图示： 组分 吸附剂 流动相 极性 活性小 极性 非(弱)极性 活性大 非极性或弱极性 第三节、薄层色谱法 （一）概述 （二）定性参数 （三）吸附剂的选择 （四）展开剂的选择 （五）薄层板的制备 （六）定性与定量分析 （一）概述 1．定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上， 形成薄层而进行色谱分离和分析的方法 2．操作过程：见图示 铺板 →活化 →点样 → 展开 →定位(定性)/洗脱(定量) 3．分离机制：吸附（分配，离子交换，空间排阻） 4．特点：分析快速、灵敏、显色方便 5．应用：药物杂质检查、纯度测定 next 图示 图示 L0 L1 L2 （二）定性参数 1. 比移值Rf 续前 讨论 Rf与K有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层板 和展开剂的性质有关 色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是薄层色谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为 续前 1）K↑大，Rf↓小 2）薄层板一定，对于极性组分 展开剂极性↑大，Rf↑大（容易洗脱） 展开剂极性↓小，Rf↓小 （不容易洗脱） 3）Rf范围：0 Rf 1 （组分迁移速度和距离小于展开剂迁移速度和距离） Rf = 0.2——0.8（常用） 0.3——0.5（最佳） 续前 2. 相对比移值Rs 讨论 参考物与被测组分在完全相同条件下展开 可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性； 参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分 相对比移值Rs与组分、参考物性质及色谱条件有关，范围可以大于或小于1 * * * *