中药制剂分析8..pptVIP

 薄层扫描法 主讲人 林於; 第四节 薄层扫描法 （ Thin Layer Chromatography Scan TLCS ） 一、定义 薄层扫描法（TLCS）系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品定性定量分析的方法。 二、特点 具有分离分析双重功能。与高效液相色谱法比较，具有多 通道效应，可同时平行分离分析多个样品；流动相用量少且选择范围宽、更换方便；固定相为一次性使用，对样品的预处理要求不高等优点。目前随着制板、点样、展开等操作的仪器化及仪器性能的改进，该法检测的灵敏度，结果的精密度与准确度均大大提高，在中药及其制剂检验中，已成为重要的分析方法。《中国药典》中有32个中成药品种采用该法进行含量测定。 ; 三、仪器及其工作原理 1.薄层扫描仪 中国药典采用双波长薄层扫描仪。常用的有岛津CS-930型和CAMAG-Ⅱ型等。 2.扫描仪工作原理 ; 3.测定方式 （1）吸收法 适用于有紫外（可见）吸收的成分，较常用。该法又可采用反射法或透射法测定。理论上讲，透射法比反射法优越，但实际工作中常用反射法，因为紫外光不能通过玻板。 （2）荧光法 适用于有荧光性质的成分，例如小檗碱等。该法仅采用反射法测定，其灵敏度比吸收法高。 4.测定波长 （1）单波长 一般用于荧光测定法，即用某一波长的紫外光（激发光）进行扫描。对玻板和斑点的质量要求较高。 （2）双波长 主要用于吸收测定法。该法可消除背景干扰，对玻板和斑点的质量要求不高，故较常用。测定时，样品波长（λs）和参比波长（λR）依次扫描斑点，所测吸收度为ΔA=Aλs －AλR。 样品波长（λs）：即被测成分的λmax 参比波长（λR）：即被测成分的λmin或此波长处无吸收。 ; 5.光束扫描方式 （1）直线扫描 适用于规则的斑点，仅用于荧光测定法。 （2）锯齿扫描 适用于不规则的斑点，测量误差小，被测成分积分值重现性好，故吸收测定法常用此扫描方式。（视频） 6.光源 （1）钨灯（W）：供可见光（350～800nm）测定，扫描有色成分的斑点。 （2）氘灯（D2）：供紫外光（200～400nm）测定，扫描有紫外吸收的成分斑点。 （3）氙灯（Xe）：供荧光测定，发射不连续光谱，常用波长为365nm。 ; 四、含量测定方法（外标法） TLCS含量测定有外标法和内标法，中国药典仅采用外标法。 1.原理 外标法系将一定量的供试品溶液和对照品溶液分别点加在同一块薄层板上，展开，显色，定位，扫描被测成分和对照品斑点，测得相应的吸收度或荧光强度积分值，根据定量关系，计算出被测成分的含量。 2.类型 根据对照品标准曲线性质的不同，外标法又分为外标一点法和外标两点法。 若标准曲线通过原点，采用外标一点法。 若标准曲线不通过原点，采用外标两点法。 ;②外标两点法：至少8个原点;（4）展开 （5）显色定位 供试品色谱中待测斑点的比移值（Rf值）和光谱扫描得到的吸收光谱最大吸收与最小吸收应与对照品相符，以保证测定结果的准确性。 （6）扫描 应沿展开方向扫描，不得横向扫描。 （7）含量计算 ①外标一点法 ▲求出供试品被测成分（斑点）的质量;▲求出供试品中被测成分的含量; ▲求出供试品中被测成分的含量（同外标一点法） 五、应用实例 1.九分散中士的宁的含量测定 九分散是由马钱子粉、麻黄、乳香和没药等制成。马钱子粉中含有士的宁、番木鳖碱等生物碱，具生理活性但也有毒性，故需控制马钱子含量。中国药典规定按干燥品计每包含马钱子以士的宁计应为4.5～5.5mg。 供试品溶液的制备 取本品10包，混合研匀。精密称取2g置具塞锥形瓶中，精密加氯仿20ml与浓氨试液1ml，轻轻摇匀，称重，于室温下放置24小时，再称重，补足氯仿减失的重量，充分振摇，滤过。精密量取滤液10ml，用硫酸溶液（3→300）分次提取，至生物碱提尽，合并硫酸液，置另一分液漏斗中，加浓氨试液使呈碱性，用氯仿分次提取，合并氯仿液，蒸干，放冷，残渣中精密加氯仿5ml使溶解，作为供试品溶液。; 对照品溶液的制备 取士的宁对照品，加氯仿制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液。 测定法 吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-丙酮-乙醇