大蒜素对同型半胱氨酸诱导的兔血管平滑肌细胞增殖作用的实验研究Experimental study of allicin on homocysteine induced proliferation of rabbit vascular smooth muscle cells.pdfVIP

提 要 目的： 1.观察大蒜素（Allicin）对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的兔血管平滑肌细胞(VSMCs) 增殖的影响； 2.观察 Allicin 对体外培养的兔 VSMCs 增殖细胞核抗原（PCNA）、c-myc 及碱性 成纤维细胞生长因子（bFGF）表达的影响； 3.为Allicin防治高同型半胱氨酸血症（HHcy）及其所致的动脉粥样硬化（AS） 提供理论依据。 方法： 组织贴块法培养原代兔VSMCs，采用差速贴壁法进行纯化，取对数生长期的第4-6 代细胞用于实验。由Hcy 诱导建立细胞增殖模型，将细胞随机分为6组，对照组、Hcy 组(只加 Hcy，终浓度为 1mmol/L)、Allicin 组中加入 Hcy（终浓度为 1mmol/L)和不 同浓度的Allicin（终浓度分别为10、5、2.5 ug/ml）、叶酸组加入Hcy（终浓度为 1mmol/L)和叶酸（终浓度为5mmol/L）。通过MTT比色法检测细胞的增殖活度，免疫 细胞化学技术检测PCNA的表达及Real-time PCR技术检测c-myc、bFGF mRNA的表达。 结果： 1、MTT检测结果显示，Hcy作用于VSMCs后，能诱导其增殖, Hcy组与对照组相比 有显著性差异(P0.01)。与Hcy组比较,不同浓度的Allicin均能明显抑制VSMCs增殖 (P0.01),并且呈剂量依赖关系，Allicin大中剂量组作用强于叶酸组(P0.01)。 2、免疫细胞化学检测结果显示，镜下观察对照组PCNA阳性表达定位于胞核,呈现 棕黄色。分析结果显示:与对照组比较，Hcy组VSMCs的PCNA的表达明显增强(P0.01)。 与Hcy组比较, Allicin大、中、小剂量组均能抑制PCNA蛋白的表达,随着Allicin浓度 的增大,PCNA的表达逐渐减弱(P0.01)，且Allicin大、中剂量组的抑制作用强于叶酸 组(P0.01或P0.05) 。 3、Real-time PCR待测mRNA的表达结果显示,与对照组相比，Hcy组可明显使 c-myc、bFGF表达上调，差异具有统计学意义(P0.01),与Hcy组比较，Allicin大、中、 小剂量组均能明显抑制Hcy诱导的VSMCs中的c-myc、bFGF mRNA表达,并且随Allicin 浓度的增加,抑制作用增强(P0.01), Allicin大、中剂量组的作用均强于叶酸组 (P0.05)，Allicin小剂量组与叶酸组比较差异无统计学意义(P0.05)。 结论： Allicin能显著抑制Hcy诱导的VSMCs的增殖，表现出剂量依赖效应；其作用机 制可能与其下调PCNA蛋白、下调c-myc mRNA及bFGF mRNA表达密切相关。 关键词 大蒜素；同型半胱氨酸；血管平滑肌细胞；增殖 Experimental Study on Effects of Allicin on Proliferative Rabbits’ Vascular Smooth Muscle Cells Induced by Homocysteine Speciality：Clinical Medicine of Integrated TCM and Western Medicine Author ：YANG Jing Tutor ：Prof. LIU De-shan ABSTRACT Objective： 1.To observe the effects of Allicin on proliferation of vascular smooth muscle cells(VSMCs) in rabbits induced by homocysteine. 2.To observe the effects of Allicin on protein expression of PCNA and mRNA expression of c-myc and bFGF. 3.To provide a theoretical basis for preventing and treating hyperhomocysteinemi