第3章-酶化学PPT.ppt

邻近效应（approximation） 酶和底物间的亲和性,使底物在酶活性中心的有效浓度大大增加。 定向效应（orientation）底物向酶活性中心靠近时，诱导酶分子构象发生改变，使活性中心的相关基团和底物的反应基团正确定向排列。 （1）邻近与定向效应 （2）底物的形变（distortion） 底物与酶结合诱导 酶的分子构象变化 底物分子敏感键产生形变 （3）酸碱催化（acid-base catalysis） 酶促反应中最普遍有效的催化剂 分狭义酸-碱催化和广义酸-碱催化。 特指通过质子酸提供部分质子,或是通过质子碱接受部分质子，降低反应活化能的过程。 His咪唑基是酸碱催化最活泼的催化基团。 酶分子中可作为酸碱催化的功能基团 最活泼基团 共价催化：形成活性很高的共价中间产物结果降低反应活化能，提高反应速度。 参与共价催化的基团主要包括 亲核基团： His 的咪唑基，Cys 的硫基，Asp 的羧基，Ser 的羟基等 亲电基团：H+ 、Mg2+、 Mn2+ 、Fe3+ （4）共价催化 （covalent catalysis） 胰凝乳蛋白酶活性中心 His57作为质子供体攻击反应中心 (5) 金属离子的催化作用 １.需要金属离子的酶分类： （1）金属酶（紧密）如：Fe2+、Fe3+、Cu2+、Zn2+、Mn2+ （2）金属-激活酶（松散）如：Na+ 、 K+ 、 Mg2+ 、 Ca2+ 2. 金属离子的催化作用： 通过结合底物为反应定向。 通过可逆的改变金属离子的氧化态调节氧化还原反应。 通过静电稳定或屏蔽静电荷。 （6） 微环境影响 疏水中心 电荷中心 实例 溶菌酶催化反应机制 溶菌酶功能：催化细菌细胞壁多糖水解。 X射线晶体结构分析和竞争性抑制剂揭示了酶的活性部位 Glu35和Asp52 。 活性部位 溶菌酶-底物复合物 A B C D E F 酶切位点 溶菌酶催化反应机理 C1+ 非极性区 极性区 HO - E环 H H2O （广义酸碱催化） 第三节 酶促反应动力学 内容：研究各种因素对酶促反应速度的影响。 影响因素包括有： 底物浓度、酶浓度、pH、温度、 抑制剂、激活剂等。 研究一种因素的影响时，其余各因素均恒定。 单底物、单产物反应 酶促反应速度用单位时间内底物的消耗量和产物的生成量来表示 反应速度取其初速度，即底物的消耗量很小（一般在5﹪以内）时的反应速度 酶促反应动力学提出前提 1、底物浓度与酶促反应速度的关系 （Michaelis—Menten曲线） 2、米氏方程的提出及推导 3、米氏常数的意义 4、米氏常数的测定 酶促反应动力学之一：底物浓度 1、底物浓度与反应速度的关系 一级反应：线速增长期 混合级反应：慢速增长期 零级反应： 最大反应速率（恒定期） 即：Michaelis —Menten曲线 1913年Michaelis和Menten根据中间产物学说提出反应速度与底物浓度关系的数学方程式，即米－曼氏方程式，简称米氏方程式(Michaelis equation)。 米氏方程： Ｖ Vmax[S] Km + [S] ＝ 2、米氏方程 [S]：底物浓度 V：不同[S]时的反应速率 Vmax：最大反应速率 Ｋm：米氏常数(Michaelis constant) E + S k1 k2 k3 ES E + P 解释酶促反应中底物浓度和反应速率关系最合理学说：中间产物学说 3、米曼氏方程的推导过程 假设一：当反应处于稳态时：反应初期，产物的生成量极少为慢反应，因此逆反应可假设不予考虑。 假设二：S浓度远远超过E浓度，假设反应初期S浓度变化忽略不计，即 [S] =[St]。 解：反应达到稳态：ES的生成速率 = ES的分解速率 k1 ([Et]－[ES]) [S] = k2 [ES] + k3 [ES] 整理得： E + S k1 k2 k3 ES E + P 3、米曼氏方程的推导过程 (2) = ([Et]－[ES])[S] k2+k3 [ES] k1 k2+k3 = Km （米氏常数） k1 令： 则(2)变为: ([Et]－[ES]) [S] = Km [ES] (1) 当底物浓度很高，酶的活性中心全部饱和时，即[Et] =[ES]，反应达最大速率 Vmax = k3[ES] = k3[Et] (5) [ES] = ────── [Et][S] Km + [S] (3) 进一步整理得: 将(5)代入(4)得米氏方程式： Vmax [S] Km + [S] V = ────── 将(3)代入(1)