第二章 核酸通论.ppt

作业 名词解释：分子杂交；Tm值；增色/减色效应；变性/复性；PCR； SouthernNorthern，Western杂交。 简述核酸的化学组成，怎样区分DNA和RNA? 说明DNA的1级到高级结构，DNA到染色体结构上的变化。 以tRNA为例说明RNA的1，2，3级结构。 简述DNA和RNA的功能； 试述核酸定量测定的方法和依据； 描述Sanger法（核酸自动测序仪）的原理。 * * * * * 核酸的研究方法 制备天然核酸必需采用温和的条件，防止过酸、过碱，避免剧烈搅拌，尤其重要的是防止核酸酶的作用 一、核酸的分离、提纯和定量测定 真核DNA以核蛋白（DNP）形式存在，DNP溶于水或高盐溶液（1mol/L NaCl），但不溶于低盐溶液（0.14mol/L NaCl 去除蛋白质：水饱和酚，氯仿异戊醇。 DNA沉淀：0.3M NaAC-70%乙醇 （一）DNA分离纯化 制备RNA时，最重要的是使RNase灭活： ①所有容器都要经过高温处理，不能高温高压的用0.1％焦碳酸二乙酯（DEPC）处理。 ②加入强变性剂（如胍盐）使RNase失活； ③在RNA的反应体系内加入RNase的抑制剂（如RNasin) （二）RNA的分离 （三）核酸含量的测定 2、定糖法 RNA：核糖→ 糠醛→ →绿色物质（670-680nm） DNA：脱氧核糖+二