端粒酶课件PPT.ppt

端粒与端粒酶 南通大学医学院病理教研室 周家名;生命钟假说; 人体是由细胞组成的，人有衰老，细胞是否也有衰老呢？ 细胞是有寿命的，这是细胞学家海弗列克（Hayflick）在四十年前发现的，他培养人体的成纤维细胞，即使在营养充分供给的情况下，细胞分裂到50代左右就停止活动了，真正地进入衰老期，这一发现似乎告诉人们在细胞内有一口 衰老钟，这限定了细胞分裂的次数，也就限定了生物的寿命。 ;; 端粒DNA复制的特点是在每次DNA 复制中，每条染色体的3`端均有一段DNA(一段端粒）无法得到复制，随着细胞每次分裂，染色体3`末端将持续丧失50-200bp的DNA，当端粒缩短到一定程度，细胞停止分裂，进入静止状态，故有人称端粒为正常细胞的分裂时钟（mistosis clock)。;两名遗传学家Muller和Mcclintock分别在不同的实验室用不同的生物做实验发现，染色体末端结构对保持染色体的稳定十分重要，Muller将这一结构命名为端粒（telomere）,这是由希腊语“末端”（telos）及“部分”（meros）组成的. 直到1985年Greider等从四膜虫中真正证实了端粒的结构为极简单的6个核苷酸序列的多次重复，以后又发现了端粒酶(telomerase TRAP-eze) 。 ; 诺贝尔瑞典卡罗林斯卡医学院宣布，将2009年诺贝尔生理学或医学奖授予美国加利福尼亚旧金山大学的伊丽莎白·布莱克本(Elizabeth Blackburn)、美国巴尔的摩约翰·霍普金斯医学院的卡罗尔-格雷德(Carol Greider)、美国哈佛医学院的杰克·绍斯塔克(Jack Szostak)以及霍华德休斯医学研究所，以表彰他们发现了端粒和端粒酶保护染色体的机理。;伊丽莎白-布莱克本; 端粒与端粒酶是当今生物学研究的热点。 端粒是位于真核细胞染色体末端的核酸－蛋白复合体,其功能在于维持染色体的稳定性和完整性。 端粒酶是一种核酸核蛋白酶,能以自身的RNA为模板合成端粒的重复序列,以维持端粒长度的稳定性。 许多研究表明,端粒、端粒酶的功能失调将影响细胞的生物学行为，包括细胞周期的稳定性、细胞增殖、癌变、凋亡、衰老。 ;端粒研究的模式生物：四膜虫; 四膜虫： 端粒DNA是由简单重复序列组成的一段核酸。 端粒以GT富集的形式延伸在CA富集链上。G尾部由于CA富集链的有限降解而产生。;研究发现，端粒DNA序列既有高度的保守性，如原生动物、真菌、高等植物及高等动物中期序列都很相似，又具有种属特异性，如四膜虫重复序列为GGGGTT,草履虫为TTGGGG,人类和哺乳动物为TTAGGG.; 几乎所有生物的端粒重复序列可以写成：　Gn(Ａ/Ｔ)m的形式。; 端粒DNA由两条互相配对的DNA 单链组成, 其双链部分通过与端粒结合蛋白质TRF1和TRF2 结合共同组成t环(t loops)。这种t 环特殊结构可维持染色体末端的稳定,保持染色体及其内部基因的完整性,从而使遗传物质得以完整复制。缺少端粒的染色体不能稳定存在。 ; 在一种端粒结合蛋白TRF2蛋白催化下，端粒（人）的3’单链末端（G尾）重复取代了双链体DNA中的同源序列以形成一个环。 TRF2蛋白与其它蛋白一起形成能稳定染色体端部的复合物。; 右图真实的显示出端粒在染色体末端形成一个特殊的DNA环。 ; 端粒的结构和功能;1 端粒DNA与结构蛋白形成的复合物如同染色体的一顶“帽子”，它既可保护染色体不被降解，又避免了端粒对端融合（end-end fusion）以及染色体的丧失。 2端粒DNA复制的特点是在每次DNA 复制中，每条染色体的3`端均有一段DNA(一段端粒）无法得到复制，随着细胞每次分裂，染色体3`末端将持续丧失50-200bp的DNA，当端粒缩短到一定程度，细胞停止分裂，进入静止状态，故有人称端粒为正常细胞的分裂时钟（mistosis clock)。 ;二、端粒酶的结构与功能 在端粒酶被发现以前，人们就推测生殖细胞之所以能世代相传，其中可能存在一种维持端粒长度的特殊机制，体细胞可能正是由于缺乏这种机制，它的染色体末端才面临着致死性缺失（deletion）的危险。 ; 这些细胞怎样保持细胞具有继续分裂或长期分裂的能力呢？科学家们发现端粒确实随着每次分裂而缩短，但也会被新合成的端粒片断再延长。科学家们怀疑，可能尚有末被发现的酶，该酶具有标准的DNA多聚酶所不具备的功能，能使已缩短的端粒延长。; ELiz实验用四膜虫的核抽提液与体外的端粒DNA进行温育，证明确实存在一