大肠杆菌分子伴侣表达的辅助载体构建及应用精选.pdfVIP

业生物技术学报，20 11 年，第19 卷，第1 期，第171~ 177 页 Journal of Agricultural Biotechnology, 2011, Vol.19, No.1, 17 1~ 177 研究资源 Resources 大肠杆菌分子伴侣表达的辅助载体构建及应用 亓振国 张宽亮 陈宗梅 程备久 范军* 安徽省作物生物学重点实验室，安徽农业大学生命科学学院，合肥230036 * 通讯作者，fanjun@ahau.edu.cn 要 异源蛋白在大肠杆菌不能正确折叠表达成包涵体，分子伴侣能在细胞内帮助异源蛋白折叠，改善蛋 白的聚集。本研究以大肠杆菌(Esc heric hia coli) DH5 菌株DNA 为模 ，利用PCR 技术扩增出6 个分子伴 侣编码基因groEL、groES、dnaK 、dnaJ、grpE 和c lpB，分别将groEL、groES 和grpE( 玉组)插入pCDFDuet-1 载 体，将dnaK 、dnaJ 和c lpB( 域组)基因插入pRSFDuet-1，构建辅助载体pR-GESP 和pC-DJKL，每个重组载体中 含有一个人工操纵子，每个基因上游含有T7 启动子。SDS结果显示，诱导后的重组大肠杆菌上清除 了DnaJ 外其它5 个蛋白明显表达。SDS分析了共表达分子伴侣对玉米(Zea mays) 四吡咯分子合成的 谷氨酸-1- 半醛氨基转移酶、尿卟啉原芋脱羧酶和西罗叶绿三酸：铁螯合酶在大肠杆菌的折叠和聚集影响， 结果显示，GroEL、GroES 和GrpE 能防止玉米西罗叶绿三酸：铁螯合酶在大肠杆菌的聚集，但DnaK、DnaJ 和 ClpB 分子伴侣对该酶则没有作用；GroEL、GroES 和GrpE 能部分抑制玉米谷氨酸-1- 半醛氨基转移酶在大 肠杆菌的聚集，但是对改变玉米尿卟啉原芋脱羧酶的聚集没有明显作用，这些结果表明，不同分子伴侣组对 改善本研究选择的3 个玉米蛋白在大肠杆菌可溶性表达的 果有差异。 关键词 分子伴侣, 大肠杆菌, 辅助载体, 构建, 应用 The Helper Vectors Construction of Chaperones from Escherichia coli and Their Application Qi Zhenguo Zhang Kuanliang Chen Zongmei Cheng Beijiu Fan Jun* The Provincial Key Laboratory of Crop Science, School of Life Science, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China *Corresponding author, fanjun@ahau.edu.cn DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2011.01.025 Abstract The heterologous proteins are often expressed as inclusion bodies in Esc he ric hia coli due to their inability to fold correctly. The chaperones can assist the heterologous protein folding and improve the protein aggregation in v ivo. Using the E. coli strain DH5 genomic DNA as templates, six genes encoding chaperones including groEL, groES, dnaK, dnaJ, grpE and clpB were amplified respectively by PCR. The groEL, groES and grpE ( 玉team) were inserted into E. coli expression plasmid pCDFDuet- 1, and the dnaK, dnaJ and c lpB ( 域team) were inserted into the expression plasmid pRSFDuet-1, respectively, to create the helper vector pR-GE