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第四章 体外放射分析;教学目的;重难点;体外放射分析指在体外实验条件下,以特异结合反应为基础,以放射性测量为手段,对生物活性物质进行超微量分析的总称。
特点:灵敏度高、特异性强、精密度好、应用范围广、方法简便。;一 体外放射分析的概述;第一节 放射免疫分析radio innumo assay,RIA;竞争放射分析;(一)放射免疫分析原理;专用符号:
1、T (Total): 加入的*Ag的放射性计数
2、B (Bound): *Ag—Ab免疫复合物的放射性计数
3、B0 Ag=0时*Ag—Ab放射性计数
4、F (Free): 游离的*Ag的放射性计数 T=B+F
5、NSB(Non-specific binding):
非特异性结合产生的放射性计数
6、结合率:B/T、B/B0、B/F
;不同坐标体系对应RIA剂量反应曲线;(二)RIA的三种基本试剂;放
射
性
免
疫
及
免
疫
放
射
分
析
试
剂
盒;1、标准品;2、标 记 物;3、抗体;抗 体;抗血清的鉴定;单 克 隆 抗 体;(三)分离方法;1、分离方法的要求
1、使结合部分与游离部分尽可能完全分开
2、分得的成分便于作放射性操作
3、分离效果不受外界干扰因素影响
4、操作简便、分离迅速、重复性好
5、试剂来源广泛、价廉易得;2、常用的分离方法;(四)放射免疫分析方法的建立;1、反 应 方 式;2、加样程序;第二节、免 疫 放 射 分 析(Immuno radio metric Assay,IRMA);一、IRMA的原理及方法学;1、单位点系统:
;2、双位点系统;[Ag];3、标记第三抗体及生物素-亲和素系统;二、IRMA的特点;三、RIA与IRMA的异同;2、二者主要区别;非放射性标记免疫分析技术;思考题
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