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NextSeqCN500测序仪使用维护标准操作规程编写人张赛编写日期2017.08.23审核人/审核日期 /批准人/批准日期/发布日期/生效日期/发布部门质量部发放范围质控上机组修订历史文件修订历史记录请参见本文附页1目的 本标准操作规程用于规范上机测序实验操作。2范围本标准化规程适用上机测序实验全过程。3职责 3.1 质控上机组：负责上机测序实验操作，邮件发送上、下机通知给相关人员，接收、处理数据分析反馈的问题样本信息。3.2质量部：负责对上机测序流程进行定期抽查，对操作中较大的变动进行识别，如有必要督促其修订文件。4 工作流程4.1 流程图4.2操作程序4.2.1 试剂准备：a) 取出在 -25℃ 到 -15℃ 的环境中存储的试剂盒。 放入装有室温清水的水槽中，直至解冻成功（大约 60 分钟）。请勿浸泡整个夹盒。 在工作台上轻敲夹盒，去除其底部的水分，然后擦干夹盒底部。 注意 [备用方案] 可以将试剂整晚放置在2℃至8℃的温度下解冻。试剂最少需要18个小时才能解冻。在此温度下，试剂最长可以稳定存放一周。将夹盒翻转 5 次以混匀试剂。 检查位置 29、30、31 和 32 处，确保试剂均已解冻。 在工作台上轻敲夹盒以减少气泡。 安全注意事项 ：这组试剂中包含甲酰胺，甲酰胺是一种可能为生殖毒素的脂族酰胺。吸入、摄取、皮肤接触和 眼睛接触都会对身体造成伤害。请穿戴防护装备，包括护目用具、手套和实验室工作服。将已 使用的试剂作为化学废物处理，并且遵循当地政府安全标准丢弃已使用的试剂。有关环境、健 康和安全的信息，请参见此试剂盒的 SDS，其载于 /sds.htmlb) 从 2℃ 到 8℃ 的存储位置取出新的流动槽包装。 将拆封的流动槽包装置于室温下 30 分钟。 注意 如果箔纸包装完整无损，流动槽可在室温下保留 12 个小时之久。请避免重复冷却和预热流 动槽。从箔纸包装中取出流动槽。 图 9从箔纸包装中取出打开透明的塑料翻盖盒，取出流动槽。 图 10从翻盖盒中取出5 使用无绒酒精棉清洁流动槽的玻璃表面。使用低尘实验室棉巾纸擦干玻璃。c) 在开始文库变性半小时前，将HT1从-20℃冰柜取出，室温下融化。4.2.2 Quick Wash：a) 每个run运行前都需要对机器进行三次Quick Wash，一次使用清洗液清洗，两次使用纯水。清洗液配置：取20μl的100% Tween20和40ml的dd H2O，混匀（现配现用）。b) 将Flow Cell、Reagent Wash Fray、Buffer Wash Fray依次放入NextSeq CN500中，选择Perform Wash，然后选择Quick Wash,按提示步骤进行操作。c) 开机以后，当提示灯显示为黄色时，需要对机器进行彻底清洗，并对仪器进行自检。将清洗液倒入Buffer Wash Fray沟槽中4.2.3上机（上机时，一人操作，一人监督，信息填写检查无误后，方可离开） a) 将1.3ml终浓度为1.8pM的文库1、使用低尘棉巾纸将标有 Load Library Here（在此处装入文库）的槽 10 封箔口擦拭干净2、使用干净的 1 毫升移液器吸头刺穿封箔口。3、将制备的1.3毫升1.8 pM文库装入标有Load Library Here（在此处装入文库）的槽10中（如图1）。4、装入文库时，避免碰到封箔口。枪头需贴着管壁将文库加入孔中，避免产生气泡。将1.3ml终浓度为1.8pM的文库，加入如图所示的黄色圆孔中。图1 Reagent Cartridgeb) 选择NextSeq Control Software软件，双击打开软件。进入上机界面，选择Sequence按钮（如图2）。图2 程序界面c) 将Flow Cell从包装中取出，用沾有酒精的无尘纸擦拭将Flow Cell的玻璃表面。使用低尘实验室棉巾纸擦干玻璃。注意不能留有灰尘。小心将Flow Cell放入对应卡槽中，点击Load键，选择Next（如图3）。图3 FC装入界面 d) 打开右侧舱门（如图4），取出废液缸，将废液全部倒出，用纸擦干，将废液缸放回原处。将Buffer Cartridge v2按机器提示，放入对应卡槽中，关闭舱门。将Buffer Cartridge v2的试剂信息拍照，以便后续填写相应信息。注意取出容器时，请用另一只手托住容器，以便持稳。安全注意事项 这组试剂中包含甲酰胺，甲酰胺是一种可能为生殖毒素的脂族酰胺。吸入、摄取、皮肤接触和眼睛接触都会对身体造成伤害。请穿戴防护装备，包括护目用具、手套和实验室工作服。将已 使用的试剂作为化学废物处理，并且遵循当地政府安全标准丢弃已使用的试剂。有关环境、健 康和安全的信息，请参见此试剂盒的 SDS，其载于 /sds.html。图4 右