小鼠胚胎干细胞裂解液诱导鸡胚成纤维细胞发生重编程的研究.pdf

2013年第49卷第11期 and Reproduction 小鼠胚胎干细胞裂解液诱导 鸡胚成纤维细胞发生重编程的研究 肖 雄。邓玉金，邱小燕，李跃民+ (重庆市牧草与草食家畜重点实验室，西南大学动物科技学院，重庆400715) 摘 要：本研究采用小鼠胚胎干细胞(ESCs)裂解液与鸡胚成纤维细胞共孵育，通过形态学观察和多能性检测， 旨在探讨小鼠ESCs裂解液逆转化鸡胚成纤维细胞为多能干细胞的可行性。结果表明：与小鼠ESCs裂解液共孵 染色。均呈阳性反应，表现出一定的多能干细胞特性；经核型分析表明这些细胞来源于鸡胚成纤维细胞。单独 的重编程操作过程和与鸡胚成纤维细胞裂解液共孵育均无法将鸡胚成纤维细胞重编程为具有ESCs特征的细 胞．说明参与重编程鸡胚成纤维细胞的物质来源于小鼠ESCs裂解液。因此，ESCs裂解液诱导体细胞重编程逆转 化为多能干细胞的作用能够在小鼠和鸡之间发生。 关键词：胚胎干细胞；裂解液；鸡胚成纤维细胞；重编程；小鼠 中图分类号：$831．3，Q813 文献标识码：A 在重编程已分化体细胞为多能干细胞的策略 重庆市中药研究所；自制8—10日龄家鸡鸡胚。 上，大多数采用的是转录因子、miRNAs和小分子物 质等【l】。多能性转录因子能够参与异种受体细胞基 因的调控和表达，启动重编程过程；miRNAs广泛参 与生长、代谢、发育和分化等生命活动，在物种进化 中具有高度的保守性。如果多能细胞提取物中存在 的重编程因子具有跨越物种界限的诱导作用，则将 Anti—SSEA一1『clone 极大地扩大裂解液介导体细胞重编程方法的应用范 sP一9002d、鼠SP检测试剂盒(中杉金桥)等。 围，解决某些物种难以获取胚胎干细胞(ESCs)系用 于制备ESCs裂解液的资源短缺问题；同时，由于 ThermoForma ESCs裂解液介导的种间重编程不存在引入外源性遗3131，USA CO)等。 传物质，这将极大地提高该方法的应用安全性。本 1．3鸡胚成纤维细胞的原代培养无菌条件下取 研究采用小鼠ESCs裂解液与鸡胚成纤维细胞进行共出8～10日龄的鸡胚，PBS清洗3遍，去除其头、尾、四肢 孵育，观察所得细胞的形态学变化，并对其进行多能 和内脏，将剩余组织剪成1mma左右的小块，再用无 性检测，通过核型分析确定重编程所得多能干细胞的 来源，探讨小鼠ESCs裂解液中有效重编程物质诱导异 种体细胞逆转化为多能干细胞的可行性。 37℃消化5～10 养液终止胰酶的消化，移液枪反复吹打离散细胞。 1材料与方法 1000 r／min离心10rain，去除上清液，DMEM培养液清 1．1实验动物昆明系小白鼠，体重28-32 g，购自 37。C、饱和湿度和5％CO：培养箱中进行培养，24h后 收稿日期：2013—1—17；侈回日期：2013—02—17 观察细胞贴壁情况。 资助项目：重庆市自然科学基金计划(CSTC，2009BB5301)；中央 1．4鸡胚成纤维细胞的传代培养选取长势和密 高校基本科研业务费专项资金(XDJK2009C163)；西南大学博士 度良好的培养瓶，吸弃培养液，采用D—PBS清洗2—3 基金(SWUll3002)；西南大学动物科技