五渗透胁迫与脯氨酸的积累.ppt

Company Logo 植 物 生 理 学 实 验 农林科技学院 主讲：化烨 农林科技学院 目 录 实验一：根系活力的测定（TTC法） 1 实验二：叶绿素a、叶绿素b含量测定 2 实验三：植物呼吸强度的测定（小篮子法） 3 实验四：可溶性总糖的测定 4 实验五：渗透胁迫与脯氨酸的积累 5 农林科技学院 实验一 根系活力的测定 1. 实验目的 理解植物根系活力的内涵； 熟悉测定根系活力的各种方法 及测定原理。 农林科技学院 实验一 根系活力的测定 2. 实验原理 氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原物质，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲腙 （TTF）。 生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化 农林科技学院 实验一 根系活力的测定 3. 实验仪器与试剂 序号 实验仪器 实验试剂 1 分光光度计 α-萘胺溶液（25μg/mL） 2 分析天平 磷酸缓冲液（pH7.0） 3 量筒 对氨基苯磺酸（1%） 4 移液管 亚硝酸钠溶液（0.1g/L） 5 容量瓶 - 6 烘箱 - 农林科技学院 实验一 根系活力的测定 4. 实验材料 水培或砂培小麦、玉米等植物根系。 农林科技学院 实验一 根系活力的测定 5. 实验步骤——制作TTC标准曲线 吸取0.25mL TTC加入10mL容量瓶 Na2S2O4 加少许Na2S2O4 乙酸乙酯 乙酸乙酯定容 0.25mL 0.50mL 1.00mL 1.50mL 2.00mL TTC含量（μg） 25 50 100 150 200 乙酸乙酯作参比，测定485nm下光密度值，绘制标准曲线 实验一 根系活力的测定 5. 实验步骤——测定根系活力 0.5g根尖样品 0.4％TTC和磷酸缓冲液的等量混合液10ml 根充分浸没于溶液中 37℃下暗保温1～3h 加入1mol/L硫酸2ml 取出根吸干水分 与3～4ml乙酸乙酯和少量石英砂在研钵内磨碎 红色提取液移入试管且用乙酸乙酯定容到10ml 空白试验作参比测485nm下吸光度 与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，其他操作同上 查标准曲线，求四氮唑还原量 实验一 根系活力的测定 5. 计算 ＝ 四氮唑还原强度 （mg/g(根鲜重)/h） 四氮唑还原量（mg） [根重（g）×时间(h)] 农林科技学院 实验二 叶绿素a、叶绿素b含量的测定 1. 实验目的 熟悉在未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素a和叶绿素b的方法及其计算。 2. 实验材料与试剂 序号 实验仪器 实验试剂 植物材料 1 高级型分光光度计 丙酮 植物叶片 2 离心机 碳酸钙 - 3 台天平 石英砂 - 农林科技学院 实验二 叶绿素a、叶绿素b含量的测定 3. 实验原理 如果混合液中的两个组分，它们的光谱吸收峰虽然有明显的差异，但吸收曲线彼此有些重叠，在这种情况下要分别测定两个组分，可根据Lambert-Beer定律，通过代数方法，计算一种组分由于另一种组分存在时对OD值的影响，最后分别得到两种组分的含量。 叶绿素a、b的吸收光谱曲线 农林科技学院 实验二 叶绿素a、叶绿素b含量的测定 3. 实验原理 A1=ρa * ka1 + ρb * kb1 （1） A2=ρa * ka2 + ρb * kb2 （2） ρa为组分a的质量浓度，单位是g/L； ρb为组分b的质量浓度，单位是g/L； A1为在波长λ1（即组分a的最大吸收峰波长）时，混合液OD值； A2为在波长λ2（即组分b的最大吸收峰波长）时，混合液OD值； ka1为组分a的比吸收系数，即组分a当质量浓度为1g/L时，于λ1波长时的OD值； kb2为组分b的比吸收系数，即组分b当质量浓度为1g/L时，于λ2波长时的OD值； ka2为组分a（质量浓度为1g/L）于λ2波长时的OD值； kb1为组分b（质量浓度为1g/L）于λ1波长时的OD值； 农林科技学院 实验二 叶绿素a、叶绿素b含量的测定 3. 实验原理 从文献中可以查到叶绿素a和b的80%丙酮溶液，当质量浓度为1g/L时，比吸收系数k值如下： 整理后，得到： ρa=12.7A663-2.69A645　　（3） ρb=22.9A645-4.68A663　　（4） ρT=ρa+ρb=8.02A663+20.21A645　　（5） 波长/nm 叶绿素a 叶绿素b 663 82.04 9.27 645 16.75 45.60 农林科技学院 实验二