化学惰性需要样品量少并不易扩散使用设备简单等聚丙稀酰胺凝胶电泳.PPTVIP

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化学惰性需要样品量少并不易扩散使用设备简单等聚丙稀酰胺凝胶电泳.PPT

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化学惰性需要样品量少并不易扩散使用设备简单等聚丙稀酰胺凝胶电泳

Dr.Chen Gao cg_npwr@ 目前分离分子的最好方法以物质的物理差别，分子大小和净电荷为基础还有分子筛的特殊作用，为分开电泳率很相近的大分子提供简单而有效的方法凝胶孔径大小可通过凝胶浓度调节，机械强度好，弹性大，不产生电渗，化学惰性需要样品量少并不易扩散使用设备简单等 AP-TMTED催化体系 TEMED催化AP生成硫酸自由基： S2O82－ 2SO4·ˉ 硫酸自由基的氧原子激活Acr单体并形成单体长链： Bis将单体长链间连成网状结构： CECS 694-02 Introduction to Bioinformatics University of Louisville Spring 2004 Dr. Eric Rouchka 聚丙烯酰胺圆盘电泳分离血清蛋白聚丙稀酰胺凝胶电泳（PAGE）缺点聚合反应必须用高纯度的试剂在没有空气的情况下控制其影响因素来实现丙稀酰胺毒性大化学聚合的凝胶孔径较小，常用于制备分离胶，重复性好。聚合反应受各种因素的影响： ? 催化剂和加速剂的浓度应选择合适的AP和TEMED浓度使聚合时间控制在30—60min内较好，过量的催化剂和加速剂会引起烧胶和蛋白质条带的畸变。 ? pH TEMED只能以游离碱的形式发挥作用，在酸性条件下，叔胺缺少自由碱基，引发AP产生自由基的过程会被延迟，聚合时间延长。 ? 温度聚合速度与温度有关，一般是高温聚合快，而聚合的速度影响交联孔径的大小，所以凝胶聚合时必须保持温度恒定，通常用与电泳相同的温度。 ? 分子氧分子氧的存在会阻止碳链的延长，妨碍聚合作用，在聚合过程中要尽量避免接触空气。 ? 杂质某些金属离子或其它杂质也会影响凝胶的化学聚合，所以应选择高纯度的Acr、Bis和AP。 CECS 694-02 Introduction to Bioinformatics University of Louisville Spring 2004 Dr. Eric Rouchka