利用MTT法测定不同浓度卡铂对Hela细胞增殖的抑制效果.doc

利用MTT法测定不同浓度卡铂对Hela细胞增殖的抑制效果 摘要：本实验主要探讨不同浓度的卡铂对Hela细胞增殖的抑制效果，利用MTT法来检测细胞相对数和相对活力，实验结果表明，不同浓度卡铂对Hela细胞的抑制率不同，各个浓度均对细胞有不同的抑制效果，抑制率最大的为卡铂浓度4.8ug/ml的培养液，其平均抑制率为49.61%，接近半数抑制浓度。 关键词：MTT 不同浓度卡铂 Hela细胞 增殖抑制 The Using of MTT method to determine different concentrations of carboplatin’s inhibitory effect to the Hela cell Proliferation Abstract: In this experiment focused on the different concentrations of carboplatin on Hela cell proliferation inhibitory effect, using MTT method to detect cells relative number and relative vitality, experimental results show that different concentrations of carboplatin on Hela cells inhibition rate is different in various concentrations on cells have different inhibitory effect, inhibiting rate for the largest concentration of carboplatin is 4.8ug/ml, the average inhibition rate was 49.61 percent, close to median inhibitory concentration. Key words: MTT different concentrations of carboplatin Hela cell proliferation inhibition Hela细胞株是由正常子宫颈细胞被一种人类乳突状瘤病毒转型成癌细胞的，而且和 正常子宫颈细胞有许多不同。宫颈癌是全球妇女恶性肿瘤中仅次于乳腺癌的第二位最常见 的恶性肿瘤。但早期宫颈癌的发生，特别是年轻化趋势十分明显。宫颈癌的化疗是以铂类药 物为基础的化疗[1]。卡铂为第二代铂类化合物，其生化物征与顺铂相似，是近年来广泛受到 重视的治疗癌症的新药。本文通过测定不同浓度卡铂对Hela细胞增殖的抑制率，从而得出 卡铂对于宫颈癌细胞的抑制具有良好的效果。为临床上卡铂的应用提供参考。 1 材料与方法 1.1材料 1.1.1细胞来源 美国购入的海拉宫颈瘤细胞系（HELA 细胞），实验室传代保种。 1.2方法 （1）接种：收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，使细胞浓度为2～3?104/ml，每孔加入细胞悬液200μl，使每孔内的细胞数为4000- 6000个。 （2）培养与药物处理：培养箱内培养24h，吸出培养液加入不同浓度梯度的各种抗肿瘤药物各200 μl，每个浓度至少接种4孔作为重复实验，否则难以反应真实情况。 （3）呈色：培养箱内继续培养到第3天，于倒置显微镜下观察细胞生长情况后，每孔加5 mg/ml的MTT溶液20 μl，继续孵育4 h，终止培养；快速翻转培养板，弃去孔内培养上清液；然后每孔加DMSO 150μl，振荡30min，使结晶物充分融解。 （4）比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果。 （5）计算与分析：按照公式计算各种药物处理对细胞增殖率的影响。细胞增殖抑制率＝（未加药物处理的对照组吸光值－药物处理组的吸光值）/未加药物处理的对照组吸光值。若该值为负说明药物对细胞增殖具有抑制作用，若值为零表明药物对细胞增殖无影响；若值为正说明药物对细胞增殖具有促进作用。 (6) 对照设置：设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），且必须设置对照孔（细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜）。 2 结果 2.1 MTT法测定化疗药物的平均抑制率? 表一 不同浓度的卡铂对Hela细胞的抑制效果 卡铂浓度 对照　 0.6ug/ml 1.2ug/ml 2.4ug/ml 4.8ug/ml 490nm波长下的吸光值 0.774 0.570 0.473 0.415 0.390 相对吸光值 -0