酶标细胞在新生儿溶血病检测中的应用.docVIP

精品论文 参考文献 酶标细胞在新生儿溶血病检测中的应用 孙来芬 李清洁 朱瑞敏（黑龙江省鹤岗市人民医院 154100) 　　【中图分类号】R722.18 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）41-0089-01 　　新生儿溶血病一般特指母婴血型不合而引起的胎儿或新生儿的免疫性溶血性疾病（简称HDN）。新生儿溶血病起源于胎儿从父亲方面继承了一些母亲没有的红细胞抗原，这些抗原可能遭受母亲免疫抗体的攻击，从而使胎儿红细胞遭到破坏，出现新生儿黄疸、贫血、水肿、肝脾肿大，甚至胎儿、新生儿死亡等溶血病的症状和合并症[1]。 我实验室在微柱凝胶卡检测中，运用了酶标记细胞，经比较使该试验的灵敏度得以提高，现报告如下。 　　资料与方法： 　　1.病例来源 2011～2013年度送来我院检测的疑是新生儿溶血病的样本共计132份，均为刚出生2～5天??的新生儿，黄疸较重且不见消退。 　　2.仪器与试剂 FYQ型免疫微柱孵育器(长春博研科学仪器有限责任公司),TD-3A型血型血清学用离心机（长春博研科学仪器有限责任公司),AC 、BC 、CC（本科室自制），抗人球蛋白检测卡（批号：0626-2010），新生儿ABO、Rh血型检测卡（批号：4663-2012）木瓜酶（上海恒远）。 　　3.方法 　　3.1标本的采集及处理 采集新生儿EDTA抗凝血2ml，不加任何抗凝的血液3～5ml，母亲的EDTA抗凝血2ml。 也有的患者是在生产时直接留取婴儿的脐带血。将采集的血样离心，婴儿及母亲的EDTA抗凝血用于检测血型，婴儿的不抗凝血离心后提取血清留作游离试验用，然后用竹签把血块捣碎，使红细胞游离，再吸取其中游离的红细胞，在吸取游离红细胞的过程中一定要注意不要将细小的血凝块吸入，以免影响实验结果。吸取的游离红细胞用生理盐水洗涤至少6次，然后制成压积红细胞，留作制备放散液用。 　　3.2放散液的制备 取洗涤好的压积红细胞和等量的生理盐水混合，置于56℃水浴箱内孵育10min，期间不断的摇动，使试管内的红细胞均匀受热，孵育完成后放入离心机内离心，取上清液即为释放液。 　　3.3酶标细胞的制备 各取3人份的A、B、O细胞制作压积细胞， 用盐水洗涤压积红细胞各1份，各加入木瓜酶2份，置于37℃水浴箱中水浴10min后取出，洗涤酶处理的红细胞1～2次，倒尽盐水，配成0.8﹪浓度的红细胞悬液备用。 　　3.4试验的操作 在新生儿溶血病血型卡中的1～6孔内各加一滴0.8﹪新生儿红细胞悬液，加样完毕后，将该卡放入专用的卡式离心机内离心，900rpm/min离2分钟，1500rpm/min离心3分钟，离心完毕后观看结果。该卡的1～5孔为血型鉴定孔，第6孔即为直抗孔，如红细胞沉于微柱凝胶检测卡的尖底部为阴性，浮于微柱凝胶柱卡的凝胶表面或胶中则为阳性，越靠近胶底部颗粒越小，反应越弱。 　　在新生儿溶血病检测卡中的1～3孔内各加一滴患儿血清，在4～6孔内各加一滴放散液，然后在1孔加A型试剂红细胞，在2孔加B型试剂红细胞，在3孔加O型试剂红细胞，在4孔加A型酶标试剂红细胞，在5孔加B型酶标试剂红细胞，在6孔加O型酶标试剂红细胞。在另一张对照的新生儿溶血病检测卡的1～3孔内各加一滴患儿血清，在4～6孔内各加一滴放散液，然后在1孔、4孔加A型试剂红细胞，在2孔、5孔加B型试剂红细胞，在3孔、6孔加O型试剂红细胞，以上各红细胞浓度均为0.8﹪。加样后将卡放入孵育器内孵育15min，最后用专用的卡式离心机900rpm离心2min,1500rpm离心3min,完毕后判读结果。浮于微柱凝胶柱卡的凝胶表面或胶中则为阳性，沉于微柱凝胶检测卡的尖底部为阴性。 　　3.5结果判断 直抗、游离试验、释放试验三项试验中三项同时为阳性或释放试验一项阳性或其中的任意两项阳性即可确诊为HDN。 　　4.结果 　　在132例标本中，其中只加普通细胞的标本中有95阳性，阳性率为71.97％，加酶标细胞的标本中有122例阳性，阳性率为92.42％，敏感性提高了20.45％，在加酶标细胞的标本中凝集强度除了强凝集外普遍提高了1+。 　　5.讨论 　　ABO HDN是临床最为常见的一类母婴血型不合溶血病，可引起高胆红素血症、贫血等临床症状，虽然通常ABO HDN的临床后果没有RhD HDN那么严重，但发生率远高于后者，若不及时治疗，严重者也可引起核黄疸，对新生儿造成不良影响。[2]因此对新生儿溶血病的诊断和治疗就显得尤为关键与重要。在新生儿溶血病的检测中，放散液的制备很关键，在整个制备的过程中试管都不能离开水浴箱的水液面，在摇动