酶联免疫吸附实验法检测乙肝两对半的临床分析 潘绍能.docVIP

精品论文 参考文献 酶联免疫吸附实验法检测乙肝两对半的临床分析 潘绍能 潘绍能 　　禄劝县人民医院检验科 云南 昆明 651500 　　摘要：酶联免疫吸附测定法是临床医学检验的最常用的方法之一，用于测定各种血清免疫学标志物，比如对于乙肝血清标志物两对半的检测，还有就是对于HCV抗体和梅毒抗体等检测，把受到检测的标本和酶标记抗原固相结合，表面抗原和抗体就起反应，从而研究乙肝病毒临床毒分类。 　　关键词：酶联免疫； 实验； 乙肝两对半； 临床分析 　　一、对于乙肝检测两对半常见影响因素分析 　　1、首先是患者发病因素，使用洗剂的方法使得固体载体形成抗原抗体复合物和其他物质分开，最后再结合固体相互载体的酶量进行相互检测物质比例关系，加入适当的酶作为底物，然后底物再被合理的转化为其他物质，最后结合固相载体的酶量和标本受大检测物质量进行一定比例关系处理，可以很多对于颜色深浅进行一定测定和推广工作，同时定性和定量分析。由于酶催化效率比较高，所以敏感度也很高，就会导致操作比较简单，我国各个级别的医疗机构都提倡进行酶的测定方法使用，标本本身和检测整个过程都会影响到测定，就会造成检测结果出现假阳性的误诊情况出现。患者也由于疾病原因会导致存在高浓度风湿因子问题，另外还会出现甲胎蛋白和嗜异性抗体问题，还可以和固相载体相互结合，导致乙肝表面抗原阳性问题。 　　2、标本因素就是标本严重溶血会影响到对于ELISA法的测定，因为血红蛋白分子中的亚铁血红素具有类似的氧化物酶活性问题，所以要结合固相载体进行一定全过程洗掉处理，最后还可以通过催化氧化物酶底物显色，导致对于假阳性处理。对于细菌污染过的血清标本可以直接影响到对于ELISA检测，通过很多文献报道都可以看出细菌数增加，都会可能对于机理进行一定细菌内部大量菌体源氧化物酶活性物质处理，也是催化物显色干扰检测出来的结果问题。一般标本储存的时间也是检测重要方法，但是如果标本储存时间太长就会导致抗原抗体免疫活性问题下降，同时也会影响到检测结果发生，如果标本不能及时得到检测，需要使用???离方法分离血清进行一定低温保存工作。另外就是标本储存时间不能过长，也会影响抗体免疫结果，应该及时进行一定血清存放保存，一般在零下4摄氏度可以保存5天，如果想保存一周时间，要对于检测的血清进行零下20摄氏度保存，血清中纤维蛋白会假阳性结果，所以对于新鲜血清标本要等血液凝固后再进行分离血清处理。 　　3、另一个就是试剂因素，利用ELISA方法试剂进行质量检测乙肝两对半检验结构最关键因素，这些因素会包括抗原和抗体纯度问题、抗体亲和力、抗体特异性和重复性等问题，主要就是固相载体上的抗原和抗体的稳定性和重复性特性。综合抗原浓度也会直接影响到检验结果，一般浓度如果很高，假阳性就会增多，标记抗体和抗原所使用的酶的比活性就会直接影响到催化活性问题，然后会要降低乙肝两对半检测灵敏度问题。通过使用低浓度的HBSAG感染者漏检问题，可以使用终止液浓度影响最终结果，如果硫酸浓度不是很高的话，对于高浓度样本要进行加入硫酸进行适当比例颜色调和工作。 　　4、还有一个重要的就是技术问题，加样的时候要将样品加在微孔板孔壁上，可以导致检测液体取值降低，甚至会造成假阴性问题，如果加样时候吸附到纤维蛋白凝块，也会导致检测液体呈现假阳性。 在加入酶时候如果因为不小心操作加入了酶结合物在孔壁上时候，可以影响到乙肝两对半判读问题，最后就是孵育方法也会影响到检测结果问题，水浴方法对于孵箱更加稳定，如果边缘比较小，孵育时间的长短也会受到一定影响，时间过长或者过短都会导致测定结果发生，同时温度也可以通过酶促进反应的抗原和抗体结果发生，如果温度比较高的话，就会导致温度降低，同样也影响到酶催化效率问题，一般选用温度是37摄氏度。 　　5、另一个就是洗板问题，在洗板过程中要对于浸泡的时间和次数进行一定控制，使得检测液体和夹心检测结果能够由强阳性变为弱阳性，或者假阴性，同时还可以使得竞争法则呈现假阳性，如果洗板次数不够时候，也会导致花板现象问题，也会影响到结果判读，会导致洗板后微孔内部液体出现残留问题。 　　二、乙肝两对半检测使用酶联免疫附试验检测方法 　　1、乙肝病毒表面抗原为乙肝病毒感染的主要病原标志病例证据，利用酶联免疫吸附试验临床对于乙肝病毒诊断是很常用方法，所以试验中的灵敏度要求非常高，特异性也得到很大提高，但是在实际操作中，各个环节都对于试验结构影响非常大，所以如果取得标本不能很好处理好，对于检测结果影响也是非常巨大的，检测中加样、孵育、洗板、终止和结果判读等需要注意对于假阳性和假阴性结果检测工作。这也要求在实际操作中要严格按照操作步骤进行实施，设立阴阳相互对照相互临界点和取值测定工作，还要对于实验室的评价工作，严谨的工作作风检测每一个标本问题，有质疑的检测结果要合