array技术在pgs中的应用PPT.pptx

Array CGH在PGS中的应用沈鉴东江苏省人民医院 生殖医学中心胚胎植入前遗传学诊断胚胎植入前遗传学诊断（preimplantation genetic diagnosis, PGD）：最早期的产前诊断（PND），亦称为孕前诊断1968年，Gardner RL和Edwards RG第一次在动物模型（兔子）上行PGD性别选择1990年， Handyside等报道了世界第 1例人类植入前性别诊断婴儿的出生目前有超过100个IVF中心可以开展PGD服务，有超过4000个PGD婴儿出生PGD PGSPGD的主要指针： 染色体异常：平衡易位、罗氏易位、倒位等 单基因疾病：常显、常隐、X连锁植入前HLA配型、非整倍体筛查胚胎植入前遗传学筛查（preimplantation genetic screening, PGS): 非整倍体筛查PGS的指针女方高龄（AMA）：大于≥35岁反复自然流产（RM）：核型正常，不明原因的反复自然流产超过3次反复种植失败（RIF）：即使是高质量的胚胎移植，也失败超过3次严重的男性不育（SMF）：少弱精子症、畸精症其他：曾有过因遗传因素导致的异常妊娠，胚胎质量差，前期曾接受过放射治疗、单胚胎移植等卵子卵裂期胚胎 (6-8 cells) 卵裂球植入BiopsyPGD/PGSICSIPGS一般流程CCCCCCCCGGGGAATTTTTTAAAAGACAATCTAGTGTC单细胞FISH技术流程Step 2: FISH杂交2) 探针变性1) DNA变性 TAGAATTCGG4) 荧光显微镜下观察 杂交TAGTAGTGTCATCACAGAATTCGG多色FISH（M-FISH）筛查流产胚胎常常涉及到的染色体的数目异常： X， Y， 13，15， 16，18， 20，21 ， 222007, Europe 57 center, 3753 cyles--ESHRE PGD consortiumHuman Reproduction，2010PGS 利 or 弊?1995年Verlinsky和Munne分别首次报道使用极体活检行PGS2007年Mastenbroek等设计多中心，随机，对照，双盲研究，认为PGS组种植率、持续妊娠率、活产率均低于对照组(Mastenbroek S et al.N Engl J Med. 2007)病人的选择不合适、FISH探针的选择不充足、活检导致的损伤、胚胎活检率低、不能诊断胚胎率高 (Cohen J, et al. Reprod BioMed Online, 2007; Kuliev ,et al. Reprod BioMed Online, 2008) 胚胎活检时机的选择极体活检D3胚胎活检滋养外胚层活检 FISH技术不足之处核丢失（Loss of nuclei）: 固定、洗片杂交失败（Failure to hybridization) ：胞浆覆盖、变性不充分等信号叠加(Overlapping of singals）：模棱两可的信号检测染色体数目有限PGS发展新动向Array技术（array CGH/SNP array） “基因芯片”是指通过微阵列技术将高密度DNA片段通过高速机器或原位合成方式以一定的顺序或排列方式使其附着在如膜、玻璃片等固相表面，以同位素或荧光标记的DNA探针，借助碱基互补杂交原理，进行大量的基因组水平研究的最新革命性技术快速、高通量、高精密度Array技术平台Array CGHSNP arrayCGH/array CGHSNP arrayarray CGH VS. SNP array平台资金投入实验操作结果分析单基因疾病PGDCases ReviewIDEmbryos BiospiedDiagnosedNormalNormal PercentagePatient1551Patient2552Patient3663Patient4664Patient5552Patient6440Patient7441Patient8552Patient9880Patient10431TOTACase 1女方输卵管阻塞，IVF-ET，反复流产2次，末次绒毛染色体69，XXY。处理方案：4个冻胚-24sure PGSEmbryo 1： Normal. Transferred and PregnancyEmbryo2：NormalEmbryo3： +1,+2,-16,-21Embryo4：-1,-9,-18,+20Case 2男方为X-linked CMT （GJB1）女方反复流产2次，末次绒毛染色体47，XY，+16处理方案：24sure PGSEmbryo 1: -9,16; maleEmbryo 2: Norm