18.基因表达的调节-1.pdf

现代动物生物化学 DNA结合蛋白 DNA binding protein 蛋白质与核酸的相互作用是调节基因表达的分子基础 大多数基因调节蛋白分子都有一套 与DNA结合的特定模体(motif)，如螺 旋-转角-螺旋、亮氨酸拉链、锌指结构和 螺旋-环-螺旋等，它们通过识别DNA双螺 旋大沟中的特定碱基序列与DNA结合， 调节基因表达的活性。 螺旋-转角-螺旋 （Helix-Turn-Helix ）两个螺旋之间被β转角 隔开，其中一个α螺旋可以识别并且结合到DNA 的大沟中 亮氨酸拉链 （Leucine zipper ） 肽链的螺旋一侧集中了疏水的氨基酸，每7个氨基酸 重复出现一个Leu，两条螺旋的Leu残基发生相互作用, 犹如拉链，并且彼此缠绕进一步形成超螺旋 （coiled coil ）。 两个Leu拉链蛋白形成二聚体，其氨基端是碱性区，是 与DNA 的结合区。 锌指结构 （Zinc finger ）是DNA结合蛋白中的通用模体，其C端是 α螺旋，与DNA结合，N端是β折叠，主要有Cys /Cys 和Cys /His 两类， 2 2 2 2 Zn离子结合在这4个保守的氨基酸残基中间，形成独立的结构域， Cys /His 锌指常串联排列。 2 2 螺旋-环-螺旋 （Helix-loop-helix ）模体的螺旋中含既亲水又亲脂的 氨基酸残基，螺旋又被连接区 （环）分开。蛋白质的同样亚基或 不同亚基借助两个螺旋对应面上疏水基团相互作用形成同质的或 异质的二聚体。此外，还有与DNA 的结合部分。 基因调节蛋白与DNA分子上特定的结构结合. DNA分子上有大(深)沟或小(浅)沟，沟的内部成对碱 基的边缘暴露在双螺旋的表面，尤其是大沟，成对碱基 边缘的4种原子或基团的排列具有特征性。 基因调节蛋白通过双螺旋的外侧识别大沟中特定的序 列(10至20个碱基)并与之非共价结合。 从DNA 大沟或小沟可观察到 碱基对边缘原子或基团的排列 一些基因调节蛋白及其所识别的DNA序列 DNA结合蛋白的分离 1. DNA与蛋白质结合后电泳迁移率改变，结合的蛋白质 越大迁移越慢，由此建立了凝胶迁移率改变(或阻滞)实 验(EMSA)方法，用以鉴研究DNA结合蛋白。 2. 利用DNA上的特异序列与结合蛋白的高亲和性，分离 纯化DNA结合蛋白亲和层析。 3. 利用一个特异的DNA探针，从cDNA文库中找出表达 这种DNA结合蛋白的克隆，然后进一步扩增和表达它。 左图: 足迹法( foot printting)可以确定蛋白质与核酸的相互作 用位置,用于基因表达调节的研究 右图: 蛋白质SDS与核酸印迹技术结合可以揭示1.与蛋 白质特异结合的核酸序列2.基因调节蛋白