5.蛋白质结构与功能+-4.pdf

现代动物生物化学 蛋白质结构与功能的 现代概念 New Concepts of Protein Structure and Functions (4) 蛋白质研究技术简介 密度梯度离心分离亚细胞器 S，沉降系数，Svedberg单位， 1S=10-13 秒，与大分子的密度 与形状有关。 分子筛 分离纯化蛋白质 （凝胶过滤） 透析(利用半透膜），超滤 （多孔滤膜）以及分子筛 （分子排阻 多孔凝胶，如葡聚糖，聚丙烯酰胺凝胶）分离不同大小的蛋白质 分子。 基于蛋白质分子的荷电性质 用离子交换 （ion exchange ） 方法分离蛋白质 图示为带有负电荷的树脂颗粒， 可以结合溶液中的带正电荷的 物质，而带正电荷少的或带负 电荷的物质则不能结合而通过。 这称为阳离子交换，反之是 阴离子交换。如： DEAE-纤维素，阴离子交换剂 CM-纤维素，阳离子交换剂 基于蛋白质分子与其配体的亲和特性分离 和纯化蛋白质 亲和层析 （affinity chromatography ） 图示一种葡萄糖结合蛋白的 纯化方法。亲和层析用于纯 化酶，激素，凝集素等 基于蛋白质的荷电性质和 分子大小进行的电泳分离 ——SDS 标 准 分 子 量 等电聚焦电泳 （IFE ） 蛋白质的免疫印迹技术 Western blotting 质谱技术 高压液相色谱 （HPLC ） MALDI-TOF MASS技术分离鉴定蛋白质的原理 （matrix-assisted laser-desorption-ionization –time-of- flight-mass spectrometry) 蛋白组学及其应用 DNA 的大规模测序改变了医学生物学研究的面貌。在 弄清楚全部基因即基因组 （Genome ）之后，为全面认识 基因组的产物蛋白质组 （Proteome ）及其在生命活动中的 作用提供了可能。 理由是： （1）基因组项目的完成提供了全部基因的序列，现在的 注意力应该转向由这些基因表达出的蛋白质的结构与功能。 （2 ）基因只是信息的载体，即使转录了，其 mRNA的水 平也不能代表细胞中活性蛋白质的量；只有蛋白质功能分 子，才能反映出基因最终表达的差异。 （3 ）基因分析方法不能解决蛋白质翻译后的修饰，细胞 定位，周转及其相互作用等问题，也不能给出细胞中发生 的动态过程。 因此，在这种形势下，蛋白质组学 （Proteomics ）作为 后基因组时代生命科学新的研究领域应运崛起。 蛋白质组学可定义为对细胞蛋白质的全面分析。它将 一系列精细的技术，主要有2