RNAi-2 生命科学前沿 教学课件.ppt

一种RNaseIII 活性核酸内切酶（Dicer） 1， AA-N19设计原则: siRNA双链设计时，一般在靶mRNA起始密码下游100～200 bp至翻译终止密码上游50～100 bp的范围内搜寻AA序列，并记录每个AA 3 端相邻19个核苷酸作为候选siRNA靶位点。 2，建议设计的siRNA不要针对mRNA的5 和3 端非编码区(untranslated regions，UTRs)，因为这些区域有丰富的调控蛋白结合位点，而UTR结合蛋白或者翻译起始复合物可能会影响siRNP(siRNA protein complex，核酸内切酶复合物)结合mRNA，从而影响siRNA干扰的效果 。 3，GC含量在30%-50%左右的siRNA要比那些GC含量偏高的更为有效。 体内RNAi机制研究在深入 是什么原因使我们有可能通过外源siRNA诱导内源性的靶基因转录后沉默？ 这个迷题吸引着越来越多的研究者投身RNAi研究中，涌现出一系列令人耳目一新的成果。 多年来，生物学家认为RNA在生命过程中的作用仅仅是将遗传信息从DNA传递到蛋白。 但近几年的一系列发现使研究者对RNA，尤其是mRNA以外的哪些小RNA的功能有了全新的认识。 体内小RNA作用的重新认识 生物体中有一群小RNA（竟占整个基因组近1%，以前被认为的“垃圾DNA”）可以影响蛋白表达水平，从而控制细胞的多种生命活动。 尤其在发育过程中2003年有一些激动人心的最新发现： 仅约22个核苷酸长度的小RNA，发现竟能引导早期发育——从使植物叶片成形到介导果蝇胚胎在植物组织中的细胞增殖； 缺少RNAi蛋白Dicer的小鼠会缺少干细胞的某些分化系（swaths of stem cells），在出生前就夭折； 小鼠中特定的小RNA能帮助引导干细胞生成胚胎的血细胞系统。 miRNA Details Originate from capped polyadenylated full length precursors (pri-miRNA) Hairpin precursor ~70 nt (pre-miRNA) Mature miRNA ~22 nt (miRNA) First discovered in 1993 by Victor Ambros at Harvard (lin-4) Let-7 discovered in 2000 by Frank Slack as a postdoc at Harvard (Ruvkun lab) What is the Difference between miRNA and siRNA? Function of both species is regulation of gene expression Difference is in where they originate siRNA originates with dsRNA siRNA is most commonly a response to foreign RNA (usually viral) and is often 100% complementary to the target miRNA originates with ssRNA that forms a hairpin secondary structure miRNA regulates post-transcriptional gene expression and is often not 100% complementary to the target Ribonucleic acid Ribonucleotides (Ribose, base, phosphate) Types Coding: messenger RNA (mRNA) Non-coding: Ribosomal RNA (rRNA) Transfer RNA (tRNA) Small nuclear RNA (snRNA) Small nucleolar RNA (snoRNA) Interference RNA (RNAi) Short interfering RNA (siRNA) Micro RNA (miRNA) 3.肿瘤治疗 Survivin基因是迄今为止克隆出的最小凋亡抑制蛋白家族成员，可通过抑制caspase级链反应下游的caspase3，caspase7发挥其抗凋亡作用 。现在研究已证实survivin基因参与了肝癌的发生与发展，并且还与化疗的耐药性相关。降低survivin基因在肝癌细胞中的表达不仅可诱导肝癌细胞的凋亡、抑制肝癌细胞的生长，还可增强其对化疗的敏感性，从而提高肝癌治疗的整体疗效。 CHENG