sp04第四章微生物的遗传变异和育种3 第三节 基因重组和杂交育种 食品微生物学课件.ppt

小总结 自然遗传转化的基本概念； 感受态； 转化模型； 自然转化→→→人工转化→→→基因工程 基因工程的奠基石和基础技术 环境中发生的自然转化：水平基因转移、生物进化 自然转化 通常将不经特殊处理的细菌细胞从其环境中吸收外来DNA的过程称为自然转化。 自然转化一般可人为地分为下列三个阶段 （1）感受态的出现 （2）DNA的结合与进入 （3）DNA的整合 人工转化 如果通过二价阳离子处理，大肠杆菌和许多G-细菌能产生感受态；对另一些细菌特别是某些G+细菌，则可通过制备原生质体实现DNA转化。 1.大肠杆菌的转化 1970年Mandel和Higa首先发现DNA在高Ca+的条件下能够被受体细胞摄入和转化。 利用转化绘制遗传图 （1）连锁检测 ： 判断两个基因是否连锁，一个可靠的依据是观察DNA浓度降低时的转化频率的改变。 （2）遗传图的绘制： 受体所摄取的外源DNA只是一个小片段，如果两个基因在染色体上相距较远，那么就不可能为同一片段DNA所携带；如果两个基因紧密连锁时，他们就有很大可能被同一转化因子所携带，一同整合到受体细胞上，可通过两个紧密连锁 的基因共转化来绘制遗传图。 2.PEG介导的转化 不自然形成感受态的G+细菌如枯草芽孢杆菌和放线菌，可通过聚乙二醇的作用实现。 3.电穿孔法 所谓电穿孔法是用高压脉冲电流击破细胞膜或将细胞膜击成小孔，使各种大分子能通过这些小孔进入细胞，所以又称电转化。 4.基因枪转化 该方法是将包裹有DNA的钨颗粒像子弹一样用高压射进细胞并使DNA留在细胞内，特别是留在细胞器中。 1. 转导：通过缺陷噬菌体的媒介作用，把供体细胞的DNA小片段携带到受体细胞中，通过交换和整合，从而使后者获得前者部分遗传性状的现象。 转导子（transducant）：获得新遗传性状的受体细胞。 2. 转导的类型 2.1 普遍转导：任何供体的染色体都可以转移至受体细胞。完全普遍转导、流产普遍转导 2.2 局限转导：靠近染色体上溶源化位点的基因DNA片段被转导。低频转导、高频转导 溶原转变 结果可以解释为细菌接合以后发生基因重组，但是必须要解决的问题： （1）转化作用的排除 （2） F质粒的发现 1. 接合概念 接合：供体菌（“雄”）通过其性菌毛与受体菌（“雌”）相接触，把F质粒或其携带的不同长度的核基因组片段传递给后者，并在后者细胞中进行双链化或进一步与核染色体发生交换、整合，从而使后者获得供体菌的遗传性状的现象，称为接合。 接合子（conjugant）：通过接合而获得新性状的受体细胞。也叫重组子（recombinant） （二）准性杂交（parasexual hybridization） 1. 准性生殖（parasexual reproduction）： 是一种在同种而不同菌株的体细胞间发生的融合，它可不借减数分裂而导致低频率基因重组并产生重组子。也可认为是在自然条件下，真核微生物体细胞间发生的一种自发性的原生质体融合现象。 2.准性生殖过程： 菌丝联结 形成异核体 核融合或核配 体细胞交换和单倍体化 单倍体杂合子 以灰黄霉素生产菌的育种为例，说明准性杂交方法的主要步骤。 半知菌的准性生殖示意图 准性生殖与有性生殖的比较 3.准性杂交育种（Breeding by parasexuality） 灰黄霉素产生菌Penicillium urticae（荨麻青梅）的准性杂交育种 选择亲本 强制异合 移单菌落 验稳定性 促进变异 筛选杂合单倍体 准性杂交原理 finish 三、基因工程 微生物育种的发展史： 初级阶段：生产选种和初级的定向选育 物理因素诱变育种 化学诱变育种 杂交育种 基因工程 一、基因工程的定义 基因工程在基因水平上的遗传工程。利用分子生物学的理论和技术，自觉设计、操纵、改造和重建细胞的遗传核心 — 基因组，使生物体的遗传性状发生定向变异，以满足于人类的需要。 基因工程（genetic engineering） ：是用人为方法将所需要的某一供体生物的遗传物质－DNA大分子提取出来，在离体条件下用适当的工具酶进行切割后，把它与作为载体的DNA分子连接起来，然后与载体一起导入某一更易生长、繁殖的受体细胞中，以让外源遗传物质在其中“安家落户”，进行正常的复制和表达，从而获得新物种的一种崭新的育种技术。 基因工程育种的特点：体外重组性；远缘杂交性；定向性。 二、基因工程的基本操作 目的基因的取得； 载体的选择； 目的基因与载体DNA的体外重； 重组载体引入受体细胞； 重组受体细胞的筛选和鉴定； “工程菌”或“工程细胞”的大规模培养 1