针对巨CK对免疫抑制法测定CK-MB的干扰及鉴别的探讨.docVIP

精品论文 参考文献 针对巨CK对免疫抑制法测定CK-MB的干扰及鉴别的探讨 史殿志 马连学 向巧巧（辽宁省抚顺市矿务局总医院检验科 113008） 【中图分类号】R392 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）14-0200-01 【摘要】 CK-MB测定作为诊断急性心肌梗死的特异性指标，已广为临床和检验界认为是一个“金标准”。CK同功酶的分离和定量方法包括电泳、离子交换层析、酶免疫抑制和放射免疫测定，现在较为常用的方法是电泳和酶免疫抑制。但巨CK对免疫抑制法测定CK-MB有干扰,平时工作中应及时发现巨CK的干扰并鉴别之。 【关键词】 CK；CK-MB CK-MB测定作为诊断急性心肌梗死的特异性指标，已广为临床和检验界所关注。典型病例根据症状、病史的心电图不难诊断，但也有相当一部分（25-40%）病例表现不典型，特别是在心电图上不出现异常的Q波，给诊断带来了困难，称之为无Q波心梗。随着我院把CK-MB测定列入“生化常规、生化全项”的分析组合中，使得CK-MB分析频率增加，我们在常规检验中经常遇到CK-MB＞总CK50%,而总CK活性正常或轻度升高，甚至出现了CK-MB高于总CK的反常现象，而这些患者均无心肌梗死的临床表现。导致这一反常现象的原因是什么？ 1 肌酸激酶（CK） CK是由M和B两类亚基组成的二聚体，CK有三种同工酶：CK-MM、CK-MB、CK-BB。巨CK1是CK同工酶与自身抗体的复合物，最多的是CK-BB与IgG 或IgA的复合物,也有少数是CK-MM与IgG或IgA的复合物，巨CK2是一种低聚的线粒体CK,又称CK-Mt,存在于细胞的线粒体膜上。当线粒体崩解时，线粒体膜的小碎片进入血液，故CK-Mt成低聚状态。 2 肌酸激酶同工酶（CK-MB）测定干扰 已知CK有三种同工酶，即CK-MM（广泛分布在骨骼和心肌中）、CK-BB（主要分布在脑、肺、胃肠道、平滑肌等）和CK-MB（主要分布在心肌中）。琼脂糖电泳可分别测定出血清中CK三种同工酶的%含量（正常参考值CK-BB无或微量，CK-MB 0-5%，CK-MM 95-100%）。免疫抑制法测定CK-MB方法设计的前提是由于CK-BB在正常人血清中极少，可将CK-BB忽略不计。其原理在于用特异的抗CK-M亚基的抗体完全抑制CK-MM和CK-MB中M亚基的活性，然后测定CK-B的活性，结果乘以2即为CK-MB活性。当血清中CK-BB增加而用免疫抑制法测定CK-MB时，由于BB不受抑制，其活性已100%测出，且还要乘以2，成倍地扩大了误差，以致出现CK-MB值等于或大于总CK活性的反常现象。此时测得的“CK-MB”并不代表真正的CK-MB水平，如果以此作为判断AMI的标准就出现问题，甚至搅乱了临床诊断，造成误诊、漏诊。 3 巨CK的干扰 巨CK1是CK同工酶与自身抗体的复合物，也有少数为CK-MM与IgG或IgA的复合物。巨CK2是一种低聚的线粒体CK，又称CK-Mt，CK-Mt存在于线粒体内膜的外表面，由两个相同的亚基组成，其功能是偶联核苷酸移位酶的能量关闭系统，在有氧的情况下通过磷酸肌酸穿梭机制提供肌肉收缩的能量。，当线粒体崩解时CK-Mt进入血液中。CK-Mt的抗原性与CK-M和CK-B不同，故抗M的抗体不能抑制CK-Mt，导致CK-MB假阳性 。CK-Mt检测主要是电泳法、免疫化学法、和组织化学方法，CK-Mt在血清中有时以寡聚的形式存在，即巨CK2，在电泳中出现于CK-MM的后面，跑得最慢。CK-Mt不同于胞浆型CK同工酶，常见的肌病、手术等胞膜损伤，不能漏出，只有当线粒体破坏时，才能从血清中检出。 4 调查结果 2010年—2011年CK-MB高于CK的120例病例调查见表 认为出现巨CK2者98%为肿瘤病人CK-Mt的出现与恶性肿瘤高度相关 5 鉴别 鉴别巨CK的方法主要有以下几种（1）琼脂糖凝胶电泳分析，可疑血清进行琼脂糖凝胶电泳结合荧光染色扫描分析，发现巨CK1位于CK-MM和CK-MB之间,巨CK2位于CK-MM的阴极侧（2）热失活法，将可疑血清置45℃20min测定CK活性，发现CK-BB和CK-MB几乎完全失活，而巨CK不受影响（3）免疫法结合电泳法，将可疑血清先于抗人IgG或IgA的抗血清进行混合，置4℃过夜,离心取上清液进行CK同工酶电泳。观察与Ig反应前后电泳区带的变化。巨CK2无任何变化，但巨CK1则不同。只要与相应的抗IgG或IgA抗血清发生反应后，原有的异常带减弱或消失，则提示巨CK1的存在，其形成与该