含离子液体介质中酶催化糖基化合成羟基苯乙基-d-葡萄糖苷.pdfVIP

　第２５卷 第３期 分　　子　　催　　化 Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．３　 　２０１１年６月 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＭＯＬＥＣＵＬＡＲＣＡＴＡＬＹＳＩＳ（ＣＨＩＮＡ） Ｊｕｎ．　２０１１　 文章编号：１００１３５５５（２０１１）０３０２６９０７ 含离子液体介质中酶催化糖基化合成４羟基苯乙基 βＤ葡萄糖苷 １ １ １ １ １，２ 岳　磊 ，林琼妹 ，许　格 ，林　磊 ，石贤爱 （１．福州大学 生物科学与工程学院　福建 福州　３５０１０８；２．福建省医疗器械和医药技术重点实验室　福建 福州　３５０００２） 摘　要：探讨了 葡萄糖苷酶在离子液体／有机溶剂／缓冲溶液介质中催化直接糖基化反应合成４羟基苯乙基 β βＤ葡萄糖苷．考察了反应体系组成、反应条件等因素对反应的影响．研究结果表明，１丁基３甲基咪唑六氟磷 酸盐（ＣＭＩｍ·ＰＦ）／１，４二氧六环／柠檬酸磷酸盐缓冲溶液是糖基化反应的合适介质．当三者的体积含量分别为 ４ ６ １７％、６８％和１５％，底物 Ｄ（＋）葡萄糖和４羟基苯乙醇的含量分别为 １００ｍｇ／ｍＬ和２２０ｍｇ／ｍＬ、酶活力为 １２Ｕ／ｍＬ时，在ｐＨ６．０、５０℃、２７５ｒｐｍ条件下进行直接糖基化，产物浓度可达１８．９ｍｇ／ｍＬ． 关　键　词：葡萄糖苷酶；４羟基苯乙基 Ｄ葡萄糖苷；离子液体；糖基化反应 β β 中图类分号：Ｏ６４３．３　　　文献标识码：Ａ 　　４羟基苯乙基 Ｄ葡萄糖苷（红景天苷）为传 β 统中药红景天中的主要有效成分，具有抗缺氧、抗 寒冷、抗疲劳、抗辐射和延缓机体衰老、防止老年 ［１］ 疾病的功能 ，可以红景天为原料直接提取，或以 化学法、植物细胞培养法以及微生物发酵法等方式 ［２７］ 制备 ，其缺点主要是产物浓度低、反应时间长 ［８］ 等 ，难以投入实际应用． 酶催化糖基化反应的条件温和，具有很高的区 域选择性和立体专一性 ［４］ ．２００４年，Ｔｏｎｇ等 利用 图１酶催化糖基化合成４羟基苯乙基 Ｄ葡萄糖苷 β 苹果籽粉 葡萄糖苷酶以４羟基苯乙醇和葡萄糖 Ｆｉｇ．１Ｅｎｚｙｍａｔｉｃｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎｆｏｒｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｓａｌｉｄｒｏｓｉｄｅ β ［５］ 为底物首次进行了合成（见图１）；此后，Ｙｕ 在叔 丁醇体系中实现了１．９ｍｇ／（ｍＬ·ｄ）的时空产率； 善，但酶的溶解性、活性和稳定性差；（４）高浓度 ［６］ 葡萄糖对酶具有抑制作用，且葡萄糖容易糖基化生 王梦亮 在缓冲溶液叔丁醇体系中反应５０ｈ后产 ［７］ 成二糖．因此，选择适当的反应介质实现在同一个 物浓度达到６．０ｍｇ／ｍＬ；刘瞞 在水１，２二乙酰氧 基乙烷体系中产物浓度达到了１２．４ｍｇ／ｍＬ． 反应体系中协调以上困难之处，是实现高效率合成 在传统水相中因受水解糖基化反应热力学平衡的 的关键． ［９］ 离子液体所具备的优良性质使其适合于同时含 限制而导致糖苷产物浓度较低 ．以传统非水有机 溶剂为反应介质是近几年酶催化生物合成的研究热 有极性底物和非极性底物的溶解、以及同时还需控 ［９１０］