养殖大黄鱼副溶血弧菌的酶联免疫吸附法研究ξ.pdfVIP

第 20 卷 　第 3 期 台　　湾 　　海 　　峡　 　　　　　　　　Vol . 20 , 　No . 3 200 1 年 8 月 J OU RN AL O F O C EAN O GRA P H Y IN TA I WAN S TRA I T 　　　　　　Aug. , 200 1 养殖大黄鱼副溶血弧菌的 酶联免疫吸附法研究 1 1 ,2 1 1 1 王 　军 ,鄢庆枇 ,苏永全 ,马 　梁 ,邵 　勋 ( 1. 厦门大学海洋系 、厦门大学亚热带海洋研究所 ,福建 厦门　36 1005 ; 2 . 集美大学水产学院养殖系 ,福建 厦门　36 102 1) 摘要 :本文建立了网箱养殖大黄鱼病原菌 ———副溶血弧菌酶联免疫吸附法 ,也即间接 EL ISA 快速检测方法. 用 0 . 5 ×10 - 3 ( V/ V ) 甲醛 、30 ℃作用 8h 灭活病原菌制成菌 苗. 用该菌苗免疫新西兰兔获得特异性抗血清 , 以辣根过氧化物酶标记羊抗兔 Ig G 为标记第二抗体 ,对副溶血弧菌进行间接 EL ISA 快速检测 ,其最低检测极限为 5 × 4 3 10 CFU/ cm . 现埸检测养殖水体中没有副溶血弧菌检出 ,患病大黄鱼肝脏副溶血弧 菌的检出率为 70 % ,外观健康大黄鱼肝脏副溶血弧菌的检出率为 20 %. 现埸检测结 果表明:间接 EL ISA 检测法不仅可以用于患病大黄鱼病原菌的快速检测 ,而且能够 检测出无病症带菌大黄鱼. 关键词 :酶联免疫吸附法 ;副溶血弧菌 ;大黄鱼 ( ) 中图分类号 :S94 1 ; S965 . 322 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 200 1 ( ) 酶联免疫吸附法 Enzyme Linked Immuno sorbent A ssay ,简称 EL ISA 是在酶免疫技术的 基础上发展起来的免疫测定技术 ,具有操作方便 、易重复 、灵敏度高 、所需仪器设备简单等优 点 , 目前已在医学临床上和生物学研究中广泛地用于检测各种抗原 、抗体[ 1 ] . 同样的 ,近年来 , 在养殖鱼类烂鳃病病原柱状屈挠菌和败血症病原嗜水气单胞菌[2 ] 、养殖对虾副溶血弧菌[3 ] 和 皮下及造血组织坏死杆状病毒单克隆抗体[4 ] 等的 EL ISA 检测也都获得了理想的结果. 国外也 有相关的报道[3 ,5 ] . 对养殖鱼类弧菌病病原副溶血弧菌的 EL ISA 快速检测尚未见到报道. 本 文研究了严重危害大黄鱼健康养殖的细菌性疾病的主要病原副溶血弧菌的 EL ISA 检测 ,并将 所建立的检测方法应用于现埸检测获得了良好的检测效果. 1 　材料与方法 1. 1 　材料 ( ) 1. 1. 1 　实验菌株 　副溶血弧菌 V ibrio p arahaem oly t icus 从患病大黄鱼鱼体分离 ,经回归感 ① ( ) 染确定为大黄鱼弧菌病病原菌 . 用于交叉反应试验的溶藻弧菌 V .