精品car-t联合移植治疗 ppt课件.pptx

CAR-T联合移植治疗复发难治ALL温州医科大学附属第一院血液科俞康 难治性白血病诊断标准经标准方案治疗2个疗程无效的初治病例CR后经过巩固强化治疗，6个月内首次复发在6个月后复发但经常规治疗无效者再次或多次复发者髓外白血病持续存在 ——全国第四届难治性白血病学术研讨会， 复发性白血病诊断标准（符合下列条件之一）诱导化疗获得CR的AL患者骨髓原始细胞大于5％但少于20％，经过一疗程标准化疗未获得完全缓解。诱导化疗获得CR的AL患者骨髓原始细胞大于20％。髓外出现白血病细胞浸润。难治性白血病的主要原因白血病细胞对化疗药物产生耐受原发耐药：化疗之前即存在继发耐药：反复化疗诱导白血病细胞产生耐药正常造血干细胞功能衰竭难治性白血病的治疗原则常用的方法使用无交叉耐药的新药组成联合化疗方案中、大剂量化疗临床试验异基因造血干细胞移植使用耐药逆转剂新的靶向治疗药物或生物治疗复发、难治性AML患者的治疗选择大剂量Ara-C再诱导治疗中剂量Ara-C为基础的方案（FLAG或联合蒽环、蒽醌类药物）再诱导治疗二线药物再诱导治疗临床试验异基因造血干细胞移植（二线方案获得CR后再移植或直接移植）虽然化疗治疗儿童急性淋巴细胞白血病取得很好的疗效，70% 以上患者可获得5年以上长期生存，但在成人ALL疗效仍然很差，尤其是复发难治性急性淋巴细胞白血病的患者预后极差，甚至即使接受挽救性造血干细胞移植治疗，大多患者仅能获得短期病情控制，如果是在异基因造血干细胞移植之后复发或无条件接受移植治疗，该类患者基本上处于无药可救境地。近期CD19嵌合抗原受体技术在治疗儿童和成人复发B-ALL方面初步显示出很好疗效，近两年的ASH会议上均有所报道。为了强调这个领域的重要性，CAR-T疗法成为2014、2015年ASH年会中的一个重点。 这种新型疗法为复发难治性B-ALL患者带来了一线生机，尤其给那些此前各种实验疗法均失败、无药可治的患者带来了希望。 CAR-T细胞治疗恶性肿瘤有多重优势：短时间内扩增肿瘤特异的T细胞群，靶抗原的非HLA依赖，可反复多疗程使用等。但作为是一种刚刚应用于临床的新型治疗方法，还存在很多问题和未确定因素需要进一步研究和探索，包括“CAR-T细胞最基本的质量标准参数的制定和监控，回输的最佳时机和方式，治疗相关不良反应及其控制，以及近期、远期确切的治疗效果等等”。尤其对中国的患者临床疗效如何？病例选择：1.1 复发难治性急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）患者经其他传统治疗手段无效，治疗前确认白血病细胞CD19+。复发难治性急性B淋巴细胞白血病定义：初治病人对标准诱导化疗无效（ALL 1个疗程，AML两个疗程）；在首次缓解6个月内、即早期复发的白血病；虽然在首次缓解6个月后复发，但以原方案再诱导 治疗失败者； 2次或2次以上复发的患者。1.2 患者自愿入组参加，依从性好，能全程配合试验观察，一般情况尚好，心、肝、肾功能基本正常，无重症感染，采血时外周血CD3+T淋巴细胞计数必须≥0.8x109/L。T淋巴细胞数量和亚型的评估白血病细胞表面抗原CD19的检测和鉴定2. 治疗方法： 用逆转录病毒载体导入CD19 CAR的自体T细胞（CAR-T-CD19）输注给患者，输注剂量为 5×108~无上限，分3-5次回输。回输前对体外制备的CAR-T细胞进行质量检测和鉴定：1）基本指标：数量、活性度、有无病原体等污染。2）靶抗原转染率和细胞杀伤功能。转染组对照组RT-PCR检测转染结果CAR质粒患者阳性对照阴性对照CAR质粒患者阳性对照阳性对照CD19GAPDH相对定量----Cp值与内参Cp值平均数Cp值样品名CD19GAPDHL2（患者）19.8912.61X1（阳参）21.7512.68NC（阴参）36.2714.19注：L2为患者细胞，X1为另一组感染效率的对照细胞，NC为经过相同时间周期培养的未感染的T细胞（NC-CD19的Cp值超过35，说明样品中没有模板）。左侧CD19的引物位于CAR的scFv上，，正常的T细胞不表达；右侧为GAPDH，作为上样内参；FCM检测转染结果未转染细胞 转染后细胞回输前T细胞亚群检测CAR-T细胞回输前1周内，除予以小剂量环磷酰胺(0.3g/M2 iv. -6d,-5d,-4d) 进行预处理帮助删除抑制性淋巴细胞之外（也有患者采用FC），禁用其他一切细胞毒药物和免疫抑制剂。回输时至少由三人（医生、护士和细胞制备技术人员）对患者的姓名、性别、年龄、住院号、细胞培养序列号和质控报告单等资料进行严格核对，确认无误后再行回输，回输过程中密切观察患者情况。3. 观察指标：1）安全性，患者接受CAR-T-CD19治疗，可能出现的 各种相关