积雪草多糖提取的脱色工艺研究.pptVIP

积雪草多糖提取的脱色工艺研究 答 辩 人：彭吉莉 班 级：化工062 指导老师：陈晓伟 韦媛媛 论文大纲 课题的主要内容 实验方法与结果 结论与讨论 致谢 课题的研究目的及意义 课题研究的目的和意义 积雪草具有多种重要生物活性,是个值得开发利用的药用植物资源。积雪草中含有的主要成分积雪草苷、羟基积雪草苷等三萜皂苷类具有抗肿瘤、抗菌等活性,已有较多文献报道。由于植物多糖具有增强免疫、抗氧化、抑菌等药理活性,而对积雪草多糖的文献报道较少。 因此本课题组主要对积雪草多糖的提取方法进行考察。由于前期实验表明,提取后的积雪草粗多糖中含有一定量的色素,影响多糖提取率,因此本实验对不同脱色方法的效果进行比较和筛选,使粗多糖得到精制,为积雪草多糖的综合利用提供新的途径。 课题的主要内容 1.对积雪草多糖不同脱色方法进行考察,确定适合的积雪草多糖的最佳脱色方法 2.对最佳脱色方法进行单因素实验 3.在单因素筛选的基础上进行正交实验，得出较优的脱色工艺 实验方法与结果 积雪草多糖的提取 称取粉碎至20目的50.00g积雪草粉末。按1：5的料液比加入95%乙醇，回流脱脂5h，过滤，溶剂乙醇减压蒸馏回收，将滤渣中溶剂挥干（先放置空气中挥干，再放入烘箱中挥干）。加入料液比1：10和1：8的蒸馏水，用恒温水浴锅加热保持温度90℃回流提取两次，每次1.5h，合并滤液，纱布过滤后滤纸抽滤，用旋转蒸发器浓缩至原滤液的1/5左右。加入浓缩液体积0.2倍的氯仿和0.04倍正丁醇混合振荡15分钟，4000r/min离心10分钟如此重复4-6次去除蛋白，将上层清液混合向其缓缓加入4倍体积的无水乙醇，使含醇量达到80%，4℃过夜，抽滤，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤沉淀2-3次。60℃干燥得粗多糖。 多糖含量测定的最大吸收波长 测定方法：采用苯酚-硫酸法 图3.1 吸光度随波长的变化曲线 对照品：0.1000mg/ml的葡萄糖溶液 样品：0.1000mg/ml的积雪草多糖溶液 图1 表明：对照品和样品的最大吸收波长均为：490nm （1）多糖含量/%=C·D/W （2）多糖保留率/%=脱色后多糖含量/脱色前多糖含量 式中：W为积雪草多糖质量（mg）；C为多糖溶液中的葡萄糖质量浓度（mg/ml）；D为多糖的稀释倍数。 （3）脱色率/%=（脱色前吸光度-脱色后吸光度）/脱色前吸光度 积雪草多糖脱色方法考察 活性炭法脱色 取多糖样品溶液50.00ml于烧杯中，加人2%活性炭，用柠檬酸调节pH至3.5，40℃水浴搅拌脱色20min，离心或过滤除去残渣。 过氧化氢法脱色 取多糖样品溶液50.00ml于烧杯中，加入过氧化氢的用量是多糖体积的25％，用1%NaOH或浓氨水调节pH至9.0、于60℃水浴中加热搅拌3h，然后加热去除过氧化氢。 不溶性壳聚糖脱色 取多糖样品溶液50.00ml于烧杯中，按3g/100ml加人不溶性壳聚糖，用柠檬酸调节pH至4.0，30℃水浴间歇搅拌脱色60min，离心或过滤除去残渣。 三种方法的结果与分析 不同脱色方法的结果 根据脱色前、脱色后多糖溶液在450nm处的吸光度计算脱色率，将脱色前后的多糖溶液经苯酚-硫酸法显色后，按标准曲线的方法测定490nm处的吸光度计算多糖保留率。结果见下表。 不溶性壳聚糖单因素实验 考察料液比对脱色效果的影响 料液比选择2.0：1、2.5：1、3.0：1、3.5：1、4.0：1这5个水平。分别固定脱色时间60min、脱色温度30℃、脱色pH值4.0。 考察温度对脱色效果的影响 脱色温度选择20、25、30、35、40℃ 这5个水平。分别固定料液比3.0：1、脱色时间60min、脱色pH值4.0。 考察pH对脱色效果的影响 分别固定料液比3.0：1、脱色时间60min、脱色温度30℃ 这三个因素，脱色pH选择3.0、3.5、4.0、4.5、5.0这5个水平。 考察脱色时间对脱色效果的影响 分别固定料液比3.0：1、脱色温度30℃、调pH为4.0，吸附时间选择30、45、60、75、90min这5个水平。 考察料液比对脱色效果的影响 由上图可以看出脱色率随料液比的增大而增大，而多糖保留率随料液比的增大而减小。料液比在2.0:1~2.5:1时脱色率增加较大而多糖保留率变化不大，料液比在3.5：1~4.0：1时脱色率变化不大而多糖保留率变化较大，综合考虑料液比应控制在2.5：1~3.5：1之间。 考察温度对脱色效果的影响的结果 由图知在20~35℃脱色率随温度的增大而增大，35~40℃时是随温度的增大而减小，在20~25℃多糖的脱色率和保留率变化不大，35~40℃变化较大，综