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第 3章 酶第三节酶促反应动力学Kinetics of Enzyme-Catalyzed Reaction 酶促反应动力学：研究各种因素对酶促反应速率的影响，并加以定量的阐述。影响因素包括：酶浓度、底物浓度、pH、温度、抑制剂、激活剂等。V[S]一、底物浓度对反应速率影响的作图呈矩形双曲线在其他因素不变的情况下，底物浓度对反应速率的影响呈矩形双曲线关系。研究前提：单底物、单产物反应；酶促反应速率一般在规定的反应条件下，用单位时间内底物的消耗量和产物的生成量来表示；反应速率取其初速率，即底物的消耗量很小（一般在5﹪以内）时的反应速率底物浓度远远大于酶浓度。一、底物浓度对反应速度的影响[S]＝0，V＝0[S]低，V∝ [S][S]高至一定程度（酶达到饱和）时， V恒定。VmaxEEEEEEEEEEEE一、底物浓度对反应速度的影响VCE[S][S]高至一定程度（酶达到饱和）时， V将不再随[S]增加而改变，即V恒定 k1k3k2E + SESE + P（一）米－曼氏方程式揭示单底物反应的动力学特性解释酶促反应中底物浓度和反应速率关系的最合理学说是中间产物学说： 中间产物Vmax[S] ──Ｖ＝ Km + [S] 1913年Michaelis和Menten提出反应速率与底物浓度关系的数学方程式，即米－曼氏方程式，简称米氏方程式 (Michaelis equation)。[S]：底物浓度V：不同[S]时的反应速率Vmax：最大反应速率(maximum velocity) Ｋm：米氏常数(Michaelis constant) 米－曼氏方程式推导基于两个假设：E与S形成ES复合物的反应是快速平衡反应，而ES分解为E及P的反应为慢反应，反应速率取决于慢反应即 V = k3[ES]。 (1)S的总浓度远远大于E的总浓度，因此在反应的初始阶段，S的浓度可认为不变即[S] =[St]。k2+k3([Et]－[ES])[S](2)=[ES] k1k2+k3令：= Km （米氏常数）k1米－曼氏方程式推导过程：当反应处于稳态时：ES的生成速率 = ES的分解速率k1 ([Et]－[ES]) [S] = k2 [ES] + k3 [ES]整理得：则(2)变为: ([Et]－[ES]) [S] = Km [ES]整理得:[Et][S](3) [ES] = ─── k3[Et][S] (4) Km + [S]将(3)代入(1) 得V = ────Km + [S] Vmax [S] V = ──── Km + [S] 当底物浓度很高，将酶的活性中心全部饱和时，即[Et] =[ES]，反应达最大速率Vmax = k3[ES] = k3[Et](5)将(5)代入(4)得米氏方程式：（二）Km与Vm是有意义的酶促反应动力学参数Km值的推导Km与Vmax的意义V Vmax[S] VmaxVmax=2Km + [S]Vmax/2[S]Km Km值的推导当反应速率为最大反应速率一半时：Km = [S] Km值等于酶促反应速率为最大反应速率一半时的底物浓度，单位是mol/L。 Km与Vmax的意义Km值定义：Km等于酶促反应速率为最大反应速率一半时的底物浓度。意义：Km是酶的特征性常数之一，只与酶的结构、底物和反应环境（如，温度、pH、离子强度）有关，与酶的浓度无关。 Km可近似表示酶对底物的亲和力；同一酶对于不同底物有不同的Km值。 Vmax定义：Vm是酶完全被底物饱和时的反应速率，与酶浓度成正比。意义：Vmax=k3 [E]如果酶的总浓度已知，可从Vmax计算酶的转换数(turnover number)，即动力学常数k3。酶的转换数 (turnover number)定义: 当酶被底物充分饱和时，单位时间内每个酶分子催化底物转变为产物的分子数。意义: 可用来比较每单位酶的催化能力。 Vmax[S] V = Km+[S]两边同取倒数1/V 1/Vmax Km1/V=1/Vmax + 1/[S] 1/[S]Vmax -1/Km（林－贝氏方程）（三）Ｋm值与Ｖmax值可以通过作图法求取1. 双倒数作图法(double reciprocal plot)，又称为 林-贝氏(Lineweaver- Burk)作图法1/Vmax [S]/V Km/Vm[S]-Km 2. Hanes作图法在林－贝氏方程基础上，两边同乘[S][S]/V=Km/Vmax + [S]/Vmax 二、底物足够时酶浓度对反应速率的影响呈直线关系在酶促反应系统中，当底物浓度大大超过酶的浓度，酶被底物饱和时，反应速率达最大速率。此时，反应速率和酶浓度变化呈正比关系。V0 [E]当[S]＞＞[E]，酶可被底物饱和的情况下，反应速率与酶浓度成正比。关系式为：V = k3 [E]当[S][E]时，V