第03章 萃取分离技术 生物分离工程ppt.pptVIP

2．空间相互作用 随着分子量增大，空间排阻作用增大，蛋白质分配系数。当相对分子质量超过2万时，分配系数很小。 根据蛋白质间相对分子质量的差别可以选择性地进行蛋白质的反微团萃取分离。 由于氨基酸的相对分子质量很小，其在反微团中的溶解主要是基于静电相互作用和下述的疏水性相互作用。 分配系数与蛋白质相对分子质量的关系 KPI 1. 蛋白质溶解方式 3.5.3 反微团萃取操作 a．液液接触法 b．注入法 c．溶解法 蛋白质的溶解方式 * * 第03章 萃取分离技术 3.4 双水相萃取 随着生物工程技术发展，一些含量微小、有生理活性、极有价值的生物质的分离提纯，成了十分关键的技术。 蛋白质和酶的分离，往往需经细胞破碎后才能提取，这类产品的活性和功能pH值、温度和离子强度等环境因素特别敏感，普通的有机溶剂萃取难于应用 。 双水相萃取技术，正是作为一种新型的分离技术应运而生，并极具应用前途。 1896年，Bei jerinck在混合琼脂与可溶性淀粉或明胶时发现，即两种亲水性的高分子聚合物并非混为一相，而是出现了两个水相的成相现象，这种现象体现出聚合物的“不相溶性”。 3.4.1 双水相系统 形成双水相的双聚合物体系很多，如聚乙二醇(polyethylene glycol，略作PEG)／葡聚糖(dextran， Dex)，聚丙二醇／聚乙二醇和甲基纤维素／葡聚糖等。 当两种聚合物水溶液互相混合时， 两种被混合分子间如存在空间排斥力，表现出不相溶性(incompatibillty)；当聚合物浓度达到一定值时，在达到平衡后就不能形成单一水相，而形成分别富含不同聚合物的两相。 双水相系统的典型相图 聚合物：P、Q 两相区 单相区 双节线(binodal)以下区域为均相区，以上为两相区。 双节线上两点间的连线如BT为系线(tie line)，系线上各点处系统的总浓度不同，但均分成组成相同而体积不同的两相。上相组成用T (Top)表示，下相组成用B (Bottom)表示。 两相的体积服从杠杆规则: (3-78) 3.4.2 双水相中的分配平衡 对于双水相萃取，确定影响分配系数的主要因素是非常重要的。 K与温度、压力以及溶质和溶剂性质有关， 与溶质的浓度无关。K的大小取决于溶质与双水相系统间的各种相互作用，其中主要有静电作用、疏水作用和生物亲和作用等。 (3-79) 和溶剂萃取法一样，溶质在两水相中的分配用分配系数K表示。用cB和cT分别表示平衡状态下下相和上相中溶质的总浓度(mol／L)，则 其中，KE，KH和KA分别为静电作用、疏水作用和生物亲和作用对分配系数K的贡献。 (3-80) (3-81) 1． 静电作用 利用相平衡热力学理论，可得非电解质型溶质的分配系数： 非电解质型溶质的分配系数 其中 Mr — 溶质相对分子质量； λ— 与溶质表面性质和成相系统有关的常数。 实际双水相系统中通常含有缓冲液和无机盐等电解质， 当所含的离子在两相中分配不等时，将在两相间产生电位差， 称为道南电位(Donnan potential)。 (3-82) 电解质型溶质的分配系数 K+，K－— 阳离子和阴离子的分配系数；Z +，Z － — 阳离子和阴离子的电荷数 式(3-81)是式(3-83)的特例(Z＝0)。两相系统中如有盐存在，会对大分子在两相间分配产生较大影响，称为盐效应。 (3-83) K 0－溶质净电荷为0时分配系数，Z － 溶质带有的净电荷数 蛋白质表面均存在疏水区。 不同蛋白质具有不同的相对疏水性。 pH为等电点的双水相中，蛋白质主要根据表面疏水性的差异产生各自的分配平衡。 2．疏水作用 双水相系统的疏水性HF与成相聚合物的种类、相对分子质量、浓度，添加盐的种类、浓度以及pH有关，一般随聚合物的相对分子质量、浓度以及盐析盐浓度的增大而增大。 影响分配系数的因素很多，加上各因素间又互相影响， 定量地将蛋白质的一些分子性质与分配系数关联起来是困难的。最佳的双水相操作条件，还需要依靠实验来获得。 3.4.3 影响分配系数的各种因素 影响生物分子分配系数的因素很多：成相聚合物的分子量和浓度、体系的pH、体系中盐的种类和浓度、 菌体或细胞的种类和浓度、温度等等。 选择合适的条件，可以达到较高的分配系数，选择性地萃取目标产物。 成相聚合物的分子量和浓度对分配平衡有重要影响。若降低聚合物的相对分子质量，则蛋白质易分配于富含该聚合物的相中；因为成