现代分离分析技术在农药残留分析中的应用.doc

现代分离分析技术在农药残留分析中的应用：本文介绍了农药残留酶免疫分析技术的原理、类型、方法的开发以及在农药残留分析中的应用。 ：酶免疫分析；农药残留农药的使用无疑大大提高了农作物的产量，但由此而产生的环境污染问题，已引起人们的高度重视。世界上许多国家都规定了食品、粮食中各种农药残留的限定量。多年来，气相色谱、高效液相色谱、质谱等方法已经非常成功地应用于环境分析，能精确地检测残留的农药量。然而，它们需要昂贵的仪器设备、复杂的前处理、熟练的技术人员及较长的分析周期。因此，人们迫切希望一种简单、快速、灵敏、价廉的检测技术，能在野外或实验室内进行大批量的检测和筛选试验。酶免疫分析(EIA)技术就此脱颖而出，尤其在农药残留分析领域，应用十分广泛。 常用的农药分析方法包括：分光光度测定法，色谱法，毛细管电泳法，电分析方法，发光分析方法，非水滴定法，免疫分析法。 在较早时期分光光度法分析过程中没有分离步骤，因此颜色反应的特异性就成了目标化合物定量分析的主要因素。如环境中总涕灭微残留量可用氮基甲酰肟基团的特殊反应来测定。这种方法由于其操作烦琐，灵敏度低，易受其他物质干扰，故现很少使用。分光光度法的优点是设备简单，适用于基层生产单位及一般实验室。 色谱法是一种分离方法，其利用物质在两相中的分配系数的微小差异进行分离。当互不相溶的两相做相对运动时，被测物质在两相之间进行连续多次分配这样原来微小的分配差异被不断放大，从而使各组分得到分离，最终达到分离、分析或测定物质一些物理化学常数的目的。 色谱法主要有：薄层色谱法（TLC），气相色谱法（GC），高效液相色谱法（HPLC）。 TLC法是一种较成熟、应用也较广的微量快速检测方法，可同时分析多个样品，多用于复杂混合物的分离和筛选。先用适宜的溶剂提取农药，经纯化浓缩后，在薄层硅胶板上展开分离，显色后与标准样比较Rf值进行定性测定。TLC除了用特殊的显色剂观察斑点颜色和用Rf值定性外，与其他技术的连用不仅可以定性，而且可对样品中被分离的一种成分进行定量分析。 气相色谱的流动相为气体，一般适合于低沸点、热稳定性较好的化合物的分离检测。它的特点是高效、快速和灵敏，其分离分析复杂化合物的能力是以前其它色谱无法比拟的，应用相当广泛。 高效液相色谱具有分离效率高，分析速度快，检测灵敏度高和应用广泛的特点，特别适合于高沸点、大分子强极性和热稳定性差的化合物的分离分析。对于受热易分解或失去活性的物质，可用HPLC分析。 此外，色谱-质谱联用技术是当代最重要的分离和鉴定的分析方法之一，既发挥了色谱的高分离能力，又发挥了质谱的高鉴别能力。这种技术适用于多组分混合物中未知组分的定性分析。目前应用较多的是气相色谱-质谱(GC—MS)联用，但GC要求样品具有一定的蒸气压，只有20％的样品可不经过预先的化学处理满足用气相色谱分离，多种情况下所研究的药物需要经过适当的预处理和衍生化。 毛细管电泳根据其原理可分为：毛细管区带电泳(简称CZE)、毛细管凝胶电泳(简称CGE)、毛细管胶束电动电泳(简称MECC)、毛细管等电聚焦电泳(简称IEF)、毛细管等速聚焦电泳(简称TIP)。由于毛细管电泳具有分离效率高、快速、样品用量少等特点，近年来得到了迅速的发展。 在农药残留分析中应用较多的主要有CZE和MECC。农药按防治对象不同可分为除草剂、杀虫剂、杀菌剂，从结构上讲又可分为手性和非手性农药。由于它是由结构差异很大的有机化合物组成，其中很多还是几何、光学异构体或对映体，在水中的极性、溶解度、离子化程度各不同，因而其分离模式就有一定差别。CZE分离的农药主要是在水溶液中呈离子态的或可离子化存在的化合物，其分离原理主要是它们在形状或质荷比上的差异，故毛细管区电泳非常适用于那些常规液相色谱难以分离的离子型化合物，其分离效率可达数百万理论塔板数，操作简便，具有很大灵活性。 这些方法需要昂贵的仪器设备、复杂的前处理、熟练的技术人员以及较长的分析周期。因此人们迫切希望有一种快速、简单、灵敏、廉价的检测技术。能在野外或实验室内进行大批量的检测和筛选试验。酶免疫分析(EIA)技术就此脱颖而出，尤其在农药残留分析领域，应用十分广泛。 免疫学检测技术是近几年发展起来的新技术。这种方法是将免疫反应和现代测试手段相结合而建立的超微量测定技术。免疫是机体识别和排除进人体内的抗原性异物的保护性应答反应。免疫分析法就是基于抗原抗体的特异性识别和结合反应为基础的分析方法。分子量大的农药(如苏云金杆菌毒素等)可以直接作为抗原免疫动物，动物的免疫系统对进入体内的异源大分子量物质发生保护性应答反应。分子量小的农药(MW2 500)一般不具备免疫原性，不能刺激机体产生免疫反应，但有与相应抗体在体外发生吸附反应的能力，即有反应原性，这类小分子物质在免疫学上称为半抗原。