鼠胚实验在新建胚胎培养室质量控制中作用的研究.docVIP

精品论文 参考文献 鼠胚实验在新建胚胎培养室质量控制中作用的研究 夏华强1 肖素梅2 廖聆燕1 　　1.株洲市中心医院生殖中心 湖南省株洲市 412000； 　　2.江西萍乡市妇幼保健医院 江西省萍乡市 337055 　　【摘 要】目的 采用鼠胚实验（mouse embryo assay，MEA）检测我中心新建的胚胎培养实验室的室内环境、新购置的仪器设备、培养耗材、培养液等是否符合人类胚胎体外培养的要求，对比配子体外授精法和收集2 细胞胚胎培养法两种检测法的差异性。方法 采用配子体外授精法和收集2 细胞胚胎培养法进行实验。在胚胎体外培养的过程中定时对胚胎的发育状况进行观察并拍照记录。结果 配子体外受精法的囊胚形成率为89.2plusmn;4.1%。收集2细胞胚胎培养法的囊胚形成率为86.8plusmn;1.2%两种方法的囊胚形成率之间差异无显著性。结论 我中心的培养体系符合人类胚胎体外培养的要求，鼠胚实验???新建胚胎培养室中质量控制中的作用是不可替代。 　　【关键词】鼠胚实验；体外受精；2细胞胚胎培养；质量控制 　　对于新建的胚胎培养实验室，胚胎培养实验室的环境温度和湿度，仪器设备的温度和性能，培养液、试剂耗材的质量等培养体系对配子及胚胎体外生长发育至关重要。因此在进行人类胚胎的体外操作和培养之前，要检测胚胎培养实验室的整个培养体系是否符合人类胚胎体外培养的要求。 　　鼠胚实验（mouse embryo assay，MEA）是对胚胎实验室的培养体系进行质量控制的方法之一。已有的研究报道鼠胚实验的可靠性受到较多因素的影响，对于是否采用鼠胚实验作为胚胎实验室质量控制方法的观点并不一致［1］。本生殖中心胚胎培养实验室在装修完成及所有的仪器设备安装调试好后，并经湖南省疾病控制中心对实验室的环境检测合格后，我们在胚胎培养实验室内进行了鼠胚实验。 　　1 材料与方法 　　1． 1 实验材料 　　1． 1．1实验动物昆明小白鼠82只，雌性41只，雄性41只，由湖南景达实验动物科技有限公司提供。 　　1．1．2主要药品和试剂孕马血清促性腺激素（Pregnant Mare Serum Gonadotropin，PMSG）购自杭州动物药品厂，批号：141112；人绒毛膜促性腺激素（Human Chorionic Gonadotropin，HCG）购于杭州动物药品厂，批号141206；G-MOPSPlus、G-IVFPlus、卵裂液、囊胚液、均购于瑞典Vitrolife公司。 　　1．1．3实验耗材巴斯德管（ORIGIO），5mL圆底小试管（BD），10mL圆底小试管（BD），1mL注射器（BD），35 mm培养皿（BD）。 　　1．2实验方法 　　1．2．1配子体外授精法实验动物的选择与处理 　　（1）体外授精（in-vitrofertilization，IVF）雌鼠的选择与处理：选择8周龄以上且体重大于25g的健康昆明雌鼠，每只雌鼠腹腔注射10IUPMSG，48h后再注射10IUHCG，于13～16h后取卵子。 　　取卵冠丘复合物步骤：将处理后的小鼠采取颈椎脱臼法处死，打开腹腔，取出输卵管于G-MOPSPlus中，在体式显微镜下于输卵管壶腹部用1 mL注射器针头做一切口，从切口的一端轻轻挤出冠丘复合物。冠丘复合物用G-IVFPlus洗涤两遍后，按每个受精皿放15个卵子放入受精皿等待受精。 　　（2）体外授精雄鼠的选择与处理：选择8周龄以上且体重大于25g的雄性特征明显的雄鼠。取小鼠精子步骤：将选择好的小鼠采用颈椎脱臼法处死，打开小鼠腹腔，取出附睾及输精管，在体式显微镜下于G-IVFPlus中在附睾及输精管上打孔使精子游出，放于培养箱中放置30 min。离心处理，计数精子浓度，放于培养箱中。 　　（3）体外受精与胚胎培养：根据精子浓度，每个受精皿加入精子的终浓度为（1．5～2）times;105/mL。受精4h后用拉制好的巴斯德管祛除颗粒细胞，把受精卵转入胚胎培养皿，进行观察后放入二氧化碳浓度为6%的培养箱继续培养。 　　1．2．2收集2细胞胚胎培养法实验动物的选择与处理：（1）雄鼠、雌鼠的选择与体外受精同。雌鼠注射10IU HCG后与选择好的雄鼠合笼，于第2天清晨检查雌鼠阴道口是否有阴栓，发现阴栓为成功交配的雌鼠。（3）2细胞胚胎的收集与培养：将成功交配的雌鼠，于交配后13h左右采用颈椎脱臼法处死，按无菌操作的要求打开小鼠腹腔，取出输卵管，于输卵管壶腹部用1 mL注射器针头做一切口，从切口的一端轻轻挤出2细胞胚胎，用G-IVFPlus洗涤两遍后，将2细胞胚胎转入卵裂液进行培养，在胚胎体外培养的第3天将胚胎转入囊胚液继续进行培养。 　　1．3统计方法 　　采用SPSS13．0软件对实验数据进行均数分析，并对两种方法的囊胚形成率进