第七章 酶工程制药PPT.ppt

* A、操作稳定性：通常半衰期达到1个月以上时，即具有工业应用价值。 B、贮藏稳定性：一般不能长期贮存，现做现用，否则活力逐渐下降。若需长期保存，可在贮存液中添加底物、产物、抑制剂和防腐剂，并于低温保存。 C、对蛋白酶的稳定性：大多数天然酶经固定化后对蛋白酶的耐受力有所提高。可能的原因是由于空间位阻效应使蛋白酶不能进入固定化酶内部。 * （3）酶学特性的变化 A、底物专一性：对底物的专一性下降。 B、最适pH：最适pH可能变大，也可能变小；pH-酶活曲线可能发生变化，其变化与酶蛋白和载体的带电性质有关。 C、最适温度：一般升高。原因是固定化后空间结构更为稳定。 D、米氏常数(Km) ：Km值均发生变化，有的增加很小，有的增加很大，但不会变小。 E、最大反应速度（Vm）：变化很小或不变。 * (4)评价固定化酶（细胞）的指标 1.固定化酶活力测定 单位;每毫克干重每分钟转化底物的量 活力回收率=固定化酶总活力/加入酶的总活力 相对活力＝固定化酶总活力/（加入酶的总活力－上清液中未偶联的酶活力） 2.偶联率及相对活力的测定 偶联率＝（加入酶活力－上清液酶活力）/加入蛋白活力 * 3.半衰期，即酶的活力降为初活力一半时所经历的连续操作时间。T1/2表示 4.热稳定性：将固定化酶在不同温度下温育1h，在最适温度下测酶活力，一般保持在60%以上 * 三、酶传感器 （一）原理 它将活性物质酶覆盖在电极表面,酶与被测的有机物或无机物反应,形成一种能被电极响应的物质。 1967年Updick和Hicks将固定化的葡萄糖氧化酶膜结合在氧电极上,做成了第一支葡萄糖电极；此后,这类酶传感器通常是通过检测产物H2O2的浓度变化或氧的消耗量来检测底物。 * * * 用葡萄糖氧化酶电极测定血液、尿、发酵液中的葡萄糖浓度； 用脲酶电极测定血液中的尿素浓度 * * （二）酶传感器主要类型 酶催化特定底物发生反应,从而使特定生成物的量有所增减.用能把这类物质的量的改变转换为电信号的装置和固定化酶耦合,即组成酶传感器. 依据信号转换器的类型,酶传感器大致可分为酶电极(主要包括离子选择电极、气敏电极、氧化还原电极等电化学电极)、酶场效应晶体管传感器(FET-酶)和酶热敏电阻传感器等 * （1）酶电极 固定化酶与各种电极结合的传感装置。一般用凝胶包埋成薄膜，与电极相连。 * 电位型电极 1．离子选择电极 对特定的离子呈选择性响应的电极，快速、灵敏、可靠、价廉，应用范围很广。在生物医学领域也常直接用它测定体液中的一些成分（如H+，K+，Na+，Ca2+等）。 2．氧化还原电极不同于离子选择电极的另一类电位型电极．这里指的主要是零类电极。 * 电流型电极 传感器中采用电流型电极为信号转换器的趋势日益增加，与电位型电极相比有以下优点： （1）电极的输出直接和被测物的浓度呈线性关系，不像电位型电极那样和被测物浓度的对数呈线性关系． （2）电极输出值的读数误差所对应的待测物浓度的相对误差比电位型电极的小． （3）电极的灵敏度比电位型电极的高． * 氧电极 有不少酶如氧化酶和加氧酶在催化底物反应时要用溶解氧为辅助试剂，反应中所消耗的氧量就用氧电极来测定． 目前用得最多的氧电极是电解式的Clark氧电极，Clark氧电极是由铂阴极、Ag/AgCl阳极、KCl电解质和透气膜所构成。当将氧电极插入含有溶解氧的溶液后，溶液中的O2将扩散，透过透气膜到达铂阴极表面被还原，还原电流值与溶解氧的量有关． * * （2）热敏电阻酶传感器 将酶催化的热量转化为电信号 稳定性好，灵敏度高，价格低 * （3）离子敏场效应晶体管酶传感器（ISFET） 对离子或分子敏感的半导体器件 ISFET与常用的绝缘栅型场效应晶体管构造相同．不过在输入栅极做了一些改进，以能与特定的化学物质反应，产生电位的酶膜取代金属极．让酶膜直接与溶液接触，由于酶膜对溶液中的离子有选择作用，从而调制ISFET的漏电流变化，利用这个特性就能检测一溶液中的离子活度． * * （4）光纤传感器 酶固定在光学透明的载体上，构成生物敏感膜，酶与底物反应引起穿越酶膜的光的性质变化，检测光信号 * 第四节 固定化酶和固定化细胞的反应器 用于酶进行催化反应的容器及其附属设备称为酶反应器。 酶催化反应过程示意图 过程调控 生物反应器 消毒 原料 预处理 产物分离提纯 产品 生物催化剂制备 空气 除菌 能量 热量 * 常见的酶反应器类型 按结构区分 搅拌罐式反应器（Stirred Tank Reactor, STR） 鼓泡式反应器(bubble column reactor, BCR ) 填充床式反应器(packed column