2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt.pptVIP

设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 ㈢.设置对照： 实例：P23 原因： ⑴土样不同， ⑵培养基污染或操作失误(或 者是混入了其他的含氮物质) 方案一：由其他同学用与A同学相同 土样进行实验 结果预测： 如果结果与A同学一致，则证明A无误； 如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。 小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 二.实验的具体操作 ㈠.土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 ◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。 ㈡.制备培养基： 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基 （三）样品的稀释 ◆应在火焰旁称取土壤10g。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。 ◆分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是不同微生物在土壤中含量不同，其目的是保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板。 细菌稀释度为104、105、106 放线菌稀释度为103、104、105 真菌稀释度为102、103、104 ◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。 ㈣.取样涂布 ㈤.微生物的培养与观察 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 培养不同微生物往往需要不同培养温度 细菌：30～37℃ 培养1～2d 放线菌：25～28℃ 培养5～7d 霉菌：25～28℃ 培养3～4d ◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。 ◆为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当事先规划时间。 不同种类的细菌形成的菌落，在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一定的特征，菌落特征可作为菌种鉴定的重要依据。 课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 CO(NH2) 脲酶 + CO2 NH3 + H2O 3、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 一.研究思路 ㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照 ㈠.筛选菌株 菌株： 纯且活状态所保存的菌种 。 菌株又称品系,表示任何由一个独立分离的单细胞(或单个病毒粒子)繁殖而成的纯种群体及其后代。 1、实例： DNA多聚酶链式反应(PCR)是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 ㈠.筛选菌株 提出的问题 —如何寻找耐高温的酶？ 解决问题的思路—寻找耐高温环境； 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 原理—高温淘汰其他菌，选出耐高温细菌，用耐高温菌种提取耐高温酶。 2、实验室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 什么是选择性培养基？ 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或 阻止其他种类微生物生长的培养基。 菌株： 纯且活状态所保存的菌种 。 菌株又称品系,表示任何由一个独立分离的单细胞(或单个病毒粒子)繁殖而成的纯种群体及其后代。 选择培养基： 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 选择培养基实例： 加入青霉素的培养基: 加入高浓度食盐的培养基: 不加氮源的无氮培养基: 不加含碳有机物的无碳培养基: 加入四环素等抗生素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 分离金黄色葡萄球菌 分离自养型微生物 分离导入了目的基因的受体细胞 分离固氮菌 1.使用选择培养基的目的是（ 　） A.培养细菌　　 B.培养真菌　　 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微 生物加以区别 C 鉴别培养基 用于鉴别不同类型微生物的培养基。在培养基中加入 某种特殊的化学物质，某种微生物在培养基中生长后 能产生某种代谢产物，而这种代谢