第五章 毛细管电泳PPT.ppt

第五章 毛细管电泳法High performance capillary electrophoresis;毛细管电泳的基本概念及主要应用;毛细管电泳;毛细管电泳的特点;毛细管电泳的特点(续）;毛细管电泳与HPLC的比较;毛细管电泳与HPLC的比较;毛细管电泳的主要应用;手性/异构体拆分;碱性药物分析—19种混合碱性药物的质量控制分析;在其它药物分析中的应用;在蛋白质和多肽分析中的应用;在糖类/糖蛋白中的应用;在核酸/核苷酸分析中的应用;在临床医学中的应用;CE/MS/MS联用技术及应用;在其它工业领域中的应用;毛细管电泳存在问题;毛细管电泳与HPLC的互补结合应用;基本理论;分离原理;例：应用最多的毛细管区带电泳（CZE）;分离原理;毛细管电泳预备知识; ψ0为表面电势 ，它在stern层中线性地降到Ψd，它是stern面和溶液内部的电势差，和特性吸附离子的性质和数量有关。在stern面外侧很近的地方有一剪切面，是紧贴在固相表面粘度迅速变化的区域，我们把剪切面上的电势称为zeta（ξ）电势，其值略低于Ψd，公式计 式中：e—溶液中每单位面积总 的过剩电荷 ε—介质的介电常数 δ --扩散层的厚度，它和电 介质浓度（C）有关， 确切地说，和溶液的离子强度有关;毛细管电泳中的zeta电势;毛细管电泳中的zeta电势;电泳;电泳（续）;电渗（electroosmotic flow ,EOF）; 在普通的毛细管区带电泳条件下，电渗流从阳极流向阴极，大小受到Zeta电势、偶电层厚度、介质粘度的影响，一般电势愈大、偶电层愈薄、粘度愈小，电渗流值就愈大。 通常，渗流速度是泳流速度5～7倍 ;电渗（续）;电渗（续）;电渗（续）;电渗（续）;毛细管电泳流型;毛细管电泳的分类及主要应用方向;各种电泳的主要应用方向;毛细管电泳仪;毛细管电泳仪的基本结构;毛细管电泳仪的性能;毛细管电泳仪的性能;毛细管电泳仪的性能;毛细管电泳仪的性能;毛细管电泳仪的性能;进样;进样--电动进样（电迁移进样）;进样--压力进样;进样--压力进样;检测器;紫外检测光路图;二极管阵列检测器;间接检测法; 样品溶质在毛细管中迁移时，为了保持局部区域的电荷平衡，要求置换同电荷离子，即在区带内产生电荷的物理置换，使背景电解质离子浓度降低，从而产生背景信号减弱。通过相对于稳态时背景信号的减弱(负峰)进行样品溶质的间接测定。 ;间接检测法;间接检测法;CE检测器的检测限及其特点;毛细管区带电泳;毛细管区带电泳---分离原理;Capillary Zone Electrophoresis;毛细管区带电泳---分离原理;毛细管区带电泳---分离原理;毛细管区带电泳---分离原理;胶束电动毛细管电泳;胶束电动毛细管电泳---分离设想;胶束电动毛细管电泳---特点及主要应用;分离原理;? 在胶束电动毛细管色谱中，中性粒子间的分离是根据粒子本身的疏水性的不同而达到的 ? 不同疏水性的粒子和胶束的相互作用不同，疏水性强的作用力大，保留时间就大，反之，保留时间短 ? 是唯一能分离带电粒子和中性化合物的模式 ; 常用的表面活性剂有：十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠、胆酸、十二烷基三甲基溴化胺、十四烷基三甲基溴化胺、十六烷基三甲基溴化胺等 ;MECC应用----七种青霉素的分离;毛细管凝胶电泳; 毛细管凝胶电泳 ; 目前主要用于生命科学和生物化学领域，如对大分子蛋白质的分离，分子量测定，DNA、寡聚核苛酸的分离与纯化。CGE与激光诱导荧光 (LIF)检测技术相结合已成为DNA快速序列分析的优选方法。 ;分离机制;CGE的特点;? 所得的峰形尖锐，是CE分离模式中柱效最高的(107/m)一种分离方法 ? 可制成不同浓度的凝胶 ? 可得到不同孔径的分子筛，用于分离不同分子量的物质 ; 毛细管等速电泳(CITP) ;毛细管等电聚焦电泳;毛细管等电聚焦电泳;?用于分离不同等电点的两性大分子，尤其在分离蛋白质方面显示了较大的优越性，可分离等电点(pI)相差0.0lpH单位的不同蛋白质 ? 除测定pI外，还可用于其他方法无法分离的蛋白样，如免疫球蛋白、血红蛋白、血清转铁蛋白以及低浓度生物样品的分析 ;分离原理;?分离原理 电解质中混合凝胶及两性电解质,通电后，两性电解质会先形成pH梯度,样品会各自向其等电点移动,直到不带电荷(等电点)时则停止移动,利用气压压力将已等电聚焦的样品推动,经过检测器进行检测 ;分离原理（续）;分离原理（续）;分离原理