2017生理实验教案.docVIP

实验【实验原理与目的】? ? ? ? 血液凝固过程可分为三个阶段：凝血酶原激活物形成，凝血酶原激活成凝血酶，纤维蛋白原转变为纤维蛋白。由于激发凝血反应的原因和反应产生的途径不同，因子Ⅹ的激活可以分为内源性和外源性两条途径。如果直接从血管中抽血观察血液凝固，此时因血液几乎没有组织因子参予，其凝血过程主要由内源性途径所激活，若用兔脑粉（脑组织含有丰富的组织因子 ）启动外源性途径，则主要反映凝血过程的第二、三阶段。若在血浆中加入外源性凝血酶，则可直接观察凝血过程的第三阶段。本实验的目的是了解血液凝固的基本过程及其影响因素。【实验对象】家兔（雌雄不拘）。【实验器材和药品】1．仪器 恒温水浴器、秒表2．器械 哺乳动物手术器械一套、兔手术台、动脉夹、塑料动脉插管、清洁小试管（10×7.5mm）11支，50ml小烧杯2个、100ml烧杯1个、0.5 ml吸管6支、10ml注射器、5号针头、滴管、试管架、吸管架。3．药品 3%戊巴比妥钠、富血小板血浆、少血小板血浆、兔脑粉悬液1／40mol CaCl2溶液、生理盐水、肝素8单位（置小试管内）、草酸钾1～2mg（置小试管内）、稀释凝血酶溶液、石蜡油、碎冰块。4．其它 带橡皮刷的玻棒或竹签、棉花。【实验步骤和观察指标】1．仪器装置 准备好37℃恒温水浴，秒表。2．手术操作? ? ? ? 家兔麻醉与固定后，分离出一侧颈总动脉，在其下穿过两条丝线。一线将颈总动脉干头端结扎，另一线备用（供固定动脉插管）。在颈总动脉近心端向心脏方向插入动脉插管（请参阅颈总动脉动脉插管术），用丝线固定。需放血时开启动脉夹即可。3．观察与纪录（1）观察纤维蛋白原在凝血过程中的作用 由颈总动脉插管放血10ml，分别注入两个小烧杯内，一杯静置；另一杯用带橡皮刷的玻棒或竹签不断地搅拌，观察血液的凝固现象。取出玻棒或竹签，用水洗净，观察缠绕在玻棒或竹签上的纤维蛋白，经过这样处理的血液是否会发生凝固？（2）血液凝固的加速和延缓 取干洁的小试管6支，按表3-7-1-1准备各种不同的实验条件。由颈总动脉插管放血，各管加血1m1，每30秒钟倾斜试斜一次，直至血液凝固而不再流动为止。记录血液凝固的时间。表3-7-1-1 影响血凝的因素 实验条件 凝血时间 解 释 粗糙面棉花少许 　 　 石蜡油润滑整个试管表面 　 　 温度37℃水浴中 　 　 浸在盛有碎冰块的烧杯中 　 　 肝素8单位（加血后摇匀） 　 　 草酸钾1～2mg（加血后摇匀） 　 　 ? ? ? ? 如果肝素管及草酸钾管不出现血液凝固，两管各加1／40mol CaCl2溶液2～3滴，观察血液是否会凝固？（3）观察内源性及外源性凝血过程 取干洁的小试管3支，按表3-7-1-2分别加入富血小板血浆、少血小板血浆、生理盐水和兔脑粉悬液。然后同时加入 CaCl2溶液，摇匀，每15秒钟倾斜试管一次，分别记录三支试管的血浆凝固时间。血浆加钙后为什么会发生凝固？ 比较第一和第二管、第一和第三管、第二和第三管的血浆凝固时间，分析产生差别的原因。表3-7-1-2 内源性和外源性凝血途径的观察实验条件 第一管 第二管 第三管 富血小板血浆 0.2ml 　 　 少血小板血浆 　 0.2ml 0.2ml 生理盐水 0.2ml 0.2ml 　 兔脑粉悬液 　 　 0.2ml 1／40 mol CaCl2 　 　 0.2ml 血浆凝固时间 　 　 　 （4）凝血酶时间的测定 取小试管1支，加入少血小板血浆0.2m1，迅速加入稀释的凝血酶溶液0.2m1，开动秒表，播匀后置37℃水浴中。不断倾斜试管，密切观察并记录血浆凝固时间，此即“凝血酶时间”。【注意事项】1．第1和第2两个观察项目可同时进行，可只放血一次。2．如果有必要进行第二次放血时，最先由插管内流出的血液应弃去。【思考题】1.请分析本实验每一项结果产生的原因。2.结合本实验结果，比较血液凝固的内源性途径与外源性途径的区别。3.凝血酶时间延长有何临床意义？ 实验 三、实验材料 一次性采血针、消毒牙签、记号笔、标准抗A血清和标准抗B血清、酒精棉球、载玻片、干棉球 四、实验步骤 1.取清洁载玻片一块，两端分别标明“抗A” 和“抗B” 。 2.消毒受检者手指指腹后，用消毒针刺破皮肤待血流出，在载玻片两端各滴一滴血。 3.在载玻片的两端血滴上的中央处分别滴加标准抗A和抗B血清各一滴。 4.竹签两头分别混合，搅匀。 5.静置5分钟观察结果。先用肉眼看有无凝集现象，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。 6. 判断血型 根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断血型。 五、注意事项 1、实验用具严格消毒，请勿污染，消毒采血针应一人一针。 2、牙签沾取血液切勿过多，以防止在血清中形成团块，影响判断