生物化学精品教学（河南科技大学）第02章 蛋白质的结构与功能.pptVIP

概述 第一节 蛋白质的分子组成 一、蛋白质的元素组成 二、蛋白质的基本组成单位—— 氨基酸（AA） （一）氨基酸的结构特点（通式） 氨基酸的分类 （二）氨基酸的理化性质 ★　等电点的计算 三、氨基酸在蛋白质分子中的连接方式 四、生物活性肽 谷胱甘肽(GSH） 蛋白质的分类 第二节 蛋白质的分子结构 一、蛋白质的一级结构 （一）概念 （二）多肽链的氨基酸序列分析 （二）多肽链的氨基酸序列分析 二、蛋白质的空间结构 过渡结构（模体、模序、超二级结构） 分子伴侣 第三节 蛋白质结构 与 功能的关系 一、蛋白质一级结构与功能的关系 二 、蛋白质空间结构 与功能的关系 肌红蛋白与血红蛋白结构 *肌红蛋白与血红蛋白结构 *血红蛋白的四级结构 （二）血红蛋白的构象变化与结合氧 *肌红蛋白与血红蛋白的氧解离曲线 * 协同效应 Hb T态和R态的互变 Hb 氧合与脱氧构象转换示意图 *血红素与O2结合示意图 三 、朊病毒与蛋白质构象病 第四节 蛋白质的理化性质 及其 提取、纯化原理 一、蛋白质的理化性质 二、蛋白质的提取与纯化原理 第五节 蛋白质组与蛋白质组学 结束 匀浆 沉淀 上清 1 000?g,5min 上清 上清 上清 上清 沉淀 沉淀 沉淀 沉淀 沉淀 4 000?g,10min 15 000?g,20min 30 000?g,30min 100 000?g,90min 100 000?g,180min （未破坏的 真核细胞） （细胞膜碎 片，细胞核） （线粒体， 细菌） （溶酶体， 菌体碎片） （微粒体） （核糖核蛋白体） 胞液 亚细胞成分的差速离心分离 差速离心法是沉降速度离心的一种，采用离心力由小到大的分阶段离心的办法，将密度不同的物质分步骤地逐一分离开来。亚细胞结构的分离就是其中最好的例子。 差速离心法 几种蛋白质的分子量与沉降系数的关系 蛋白质分子 分子量 沉降系数 （ S ） 核糖核酸酶 12 900 1 ． 85 细胞色素 C 15 600 1 ． 90 肌红蛋白 17 200 2 ． 04 胃蛋白酶 37 000 3 ． 3 b - 乳球蛋白 41 500 3 ． 12 卵白蛋白 44 000 3 ． 55 马血红蛋白 68 000 4 ． 41 人血清白蛋白 69 000 4 ． 6 血纤维蛋白原 330 000 7 ． 9 脲酶 480 000 18 ． 6 猪甲状腺球蛋白 630 000 19 ． 2 在单位力场下，溶质分子的沉降速度与离心角速度、离心半径呈正比，其比例常数为沉降系数，用S表示，单位为秒。 = s· ?2 ? 一般蛋白质的沉降系数为10?13?10?12秒，故人们以Svedberg(S)单位来表示沉降 系数，即1S = 10?13秒。沉降系数的大小与蛋白质的密度和形状相关。 透析(dialysis): 磁力搅拌器 透析前 透析后 透析袋 　　通过透析，小分子通透透析袋，散布于透析液中，大分子量的蛋白质不能通透透析袋，留在透析袋内。从而，蛋白质溶液中的小分子物质通过透析被分离除去。 超滤（ultrafiltration）: 在一定的压力下，使蛋白质溶液在通过一定孔径的 超滤膜时，小分子量物质滤过，而大分子量的蛋白质被 截留，从而达到分离纯化的目的。这种方法既可以纯化 蛋白质，又可达到浓缩蛋白质溶液的目的。 磁力搅拌器 待超滤的蛋白质溶液 加压的氮气 超滤膜 凝胶过滤（gel filtration）： 凝胶过滤又称分子筛层析，在层析柱内填充惰性的 微孔胶粒（如交联葡聚糖），将蛋白质溶液加入柱上部 后，小分子物质通过胶粒的微孔进入胶粒，向下流动的 路径加长，移动缓慢；大分子物质不能或很难进入胶粒 内部，通过胶粒间的空隙向下流动，其流动的路径短， 移动速度较快，从而达到按不同分子量将溶液中各组分 分开的目的 洗脱液 胶粒 样品 小分子 大分子 蛋白浓度 洗脱体积 各试管进行连续收集 试管走行方向 凝胶过滤分离蛋白质示意图 凝胶过滤 凝胶过滤分离蛋白质示意图 负协同效应 正协同效应 协同效应 协同效应： 一个亚基与其配体（如Hb中的配体为O2）结合后，能影响此寡聚体中另一亚基与配体的结合能力，我们把这种现象称为协同效应。 Hb T态和R态的互变 α1 α2 β2 β1