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* 人工诱导龙血竭龙血素B含量的测定 学 院 中 药 学 院 学生姓名 李 伟 专 业 中药资源与开发 实习单位 广东石岐制药有限公司 导师姓名 马 元 英 人工诱导龙血竭龙血素B含量的测定 主要内容 前言 试验研究 讨论 致谢 前言 龙血竭为传统名贵中药,主要在明清以前使用。明清后使用主要为棕榈科龙血树所产血竭又名麒麟竭、竭留、海蜡等,是中医常用的活血散淤和止血药,其性平,味甘、温、咸, 平，归心、肝经，具有良好的活血散淤、定痛止血、生肌敛疮等功效,主要用于外伤出血、溃疡不敛、跌打损伤、淤滞等症,有“活血之圣药”的美誉(明·李时珍《本草纲目》卷34)。 前言 龙血竭（Dragon’s blood）主要来源于龙舌兰科(现合并到百合科)龙血树属或其它科属植物的树脂，是龙血树树干受到损伤后，在一定的生态条件下，经微生物浸染，发生生理生化转化，使内皮层和髓部逐渐转变为红色树脂。龙血竭的形成是龙血树对外界因子胁迫和刺激作用的积极响应，是一个以次生代谢产物为分子基础的复杂的生理生态过程。目前龙血竭的运用越来越广泛，特别是在治疗冠心病、脑梗塞、上消化道出血和妇科血症等方面取得了显著疗效。 前言 本实验采用RP-HPLC色谱法，结合对照品龙血素B建立人工诱导龙血竭与其基源植物的HPLC指纹图谱分析方法,阐明两者之间的差异，为人工诱导龙血竭是否能替代其基源植物提供基础数据 材料与方法 3.1鉴别 (1)取本品粉末5g，加氯仿25ml，置水浴中加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至适量。加硅胶2g，拌匀，蒸干，研匀。加于硅胶柱上(玻璃柱，内径10mm，硅胶3g，100～200目，干法装柱)，用石油醚(60～90℃)-氯仿(5:1)的混合溶液30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干。残渣加氯仿0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取剑叶龙血素C，加氯仿制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上供试品溶液20μl，对照品溶液10μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶HF254薄层板上。以石油醚(60～90℃)-氯仿(20:1)为展开剂,展开，取出，晾干。置紫外光灯(254nm)下检视。 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置下，显相同颜色的斑点 材料与方法 (2)取本品粉末0.5g，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)70ml，水浴中加热回流1小时。提取液置水浴上蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。另取龙血竭对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液2～4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以氯仿-甲醇(99:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液(1→10)，在105℃加热5～10分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 (3)取鉴别(2)项下石油醚提取后的不溶物,挥尽石油醚，置索氏提取器中，加醋酸乙酯70 ml，水浴回流1小时。提取液浓缩至约5 ml，加聚酰胺2g，拌匀，蒸干，置于已处理好的聚酰胺柱上(玻璃柱，内径10 mm，14～30目，5g，湿法装柱)，以50%乙醇100 ml洗脱(流速1.5 ml/min)，洗脱液弃去，继以乙醇50 ml洗脱(流速1.5 ml/min)，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加氯仿10 ml使溶解，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。另取龙血竭对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各4～6μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(10:1)为展开剂，展开,取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液。在105℃加热约5分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点 结果 3.2.1对照品溶液的制备 精密称取龙血素B对照品适量，加甲醇溶解，使成每1ml中含龙血素B 0.024mg溶液，作为对照品溶液。进样量10 μl,见图1 图1龙血素B色谱图 3.2.2供试品溶液的制备 称取人工诱导龙血竭与自然生长型龙血竭1 g，精密称定，加硅藻土2g，混匀，置索氏提取器中，加氯仿100ml，置水浴中加热回流6小时，提取液减压浓缩至近干，加醋酸乙酯适量使溶解。移置10 ml量瓶中，用醋酸乙酯洗涤容器并稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，收集续滤液作为供试品溶液。.2.3方法学考察 精密度实验 取龙血竭同一