基于大肠杆菌受体菌DH5__as_省略_作为基因转化_表达操作系统的评估_原志伟精选.pdf

DOI:10.13344/j.microbiol.china.2010.01.007 微生物学通报 JAN 20, 2010, 37(1): 48−54 Microbiology China © 2010 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 基于大肠杆菌受体菌 DH5α△asd 缺失株的构建 及作为基因转化、表达操作系统的评估 1,2 3 1 1 1 1* 原志伟 朱晓芳 朱春红 朱军 王建业 朱国强 (1. 225009) (2. 264300) (3. 225001) : (E. coli) asd , λ Red 摘 要 基于大肠杆菌 染色体上 基因的已知序列 利用 噬菌体的 同源重组系统一 E. coli DH5α asd DH5α △asd::cat, 步法构建 的 基因缺失突变株 在二次重组中利用携带能够表达 FLP pCP20 , 位点特异性重组酶的质粒 介导二次同源重组 以去除上述缺失突变株中氯霉素抗性筛选 PCR , DH5α △asd 基因。结合 扩增和测序结果 证明 缺失突变株的正确构建。该缺失突变株失去了 LB , DAP asd (asd ) 在普通 培养基上生长的能力 只有添加 或导入表达 基因的质粒 基因互补试验 才能 在LB 培养基上生长, 与原型DH5α比较, 其生长速度和生长对数期、接受不同拷贝数质粒的转化效 率几乎相一致。基于该缺失突变株构建出以asd 营养基因为标志的大肠杆菌染色体-质粒平衡致死系 统。体外培养连续传代50 代次, pnirBMisL-fedF-asd 质粒不丢失, 并功能性表达F18 大肠杆菌黏附 素FedF 。 关键词: 大肠杆菌DH5α, 受体菌, Red 重组系统, asd 基因, 突变株 The Construction of E. coli DH5α△asd Deletion Mutant and the Evaluation on Its Potential on Gene Transformation-expression System YUAN Zhi-Wei 1,2 ZHU Xiao-Fang3 ZHU Chun-Hong 1 ZHU Jun 1