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医学论文-壬基酚对成年雌性SD大鼠生殖功能的影响 【摘要】? 目的：观察壬基酚对成年雌性SD大鼠生殖功能的影响。方法： 对成年雌性SD大鼠每天灌胃壬基酚（50、100、200 mg·kg-1 ），阳性对照组每天灌胃乙菧酚（0.2 mg·kg-1），阴性对照组管饲花生油。通过阴道涂片观察性周期的变化，28 d后处死大鼠，放免法测定血清雌激素、黄体生成素浓度，并作垂体、子宫、卵巢组织病理学检查，免疫组化技术检测子宫的雌激素受体（ER）表达情况。结果：壬基酚剂量≥100 mg·kg-1可使大鼠出现持续动情期，血清雌激素、黄体生成素水平降低（P＜0.05），卵巢组织病理学切片显示卵泡数目减少（P＜0.05），子宫ER表达无明显差异。结论：壬基酚在较高浓度时可抑制雌性大鼠的生殖功能。 【关键词】? 壬基酚 生殖功能 大鼠 SpragueDawley ??? 烷基酚类化合物是我国常用的第二大类非离子型表面活性剂烷基酚聚氧乙烯醚的主要降???产物，广泛存在于水、土壤、空气中。烷基酚类化合物主要用于生产洗涤剂、润滑剂、油漆、化妆品及锄草剂等，其主要包括辛基酚（OP）、壬基酚（NP）等，NP约占80%，OP为20%左右。许多实验研究结果证实壬基酚具有雌激素样作用，有关其生殖发育毒性的研究，特别是对雄性动物生殖功能的影响，逐渐引起人们的高度关注［12］，但对雌性动物生殖功能的影响国内研究尚少。本研究旨在探索壬基酚对哺乳动物成年雌性SD大鼠生殖功能的影响。 ??? 1? 材料与方法 ??? 1.1? 实验动物 ??? 雌性SD大鼠10周龄，质量210 260 g，共40只，购自东南大学医学院实验动物中心。 ??? 1.2? 试剂 ??? 壬基酚购于无锡市凌飞助剂厂，纯度＞99%。市售鲁花牌花生油由莱阳鲁花浓香花生油有限公司生产。乙菧酚由上海信谊康捷药业有限公司生产。 ??? 雌二醇（E2）、黄体生成素（LH）放免试剂盒由原子高科股份有限公司生产。雌激素α受体（ERα）单克隆抗体为Santa Cruz Biotechnology Inc产品。DAB(二氨基联苯胺)、SP免疫组化试剂盒购自北京中杉生物技术有限公司。 ??? 1.3? 动物饲养及分组 ??? 大鼠以不含植物雌激素的饲料（去除大豆）喂养，每天上午9：00 11：00阴道涂片，观察大鼠的性周期，观察4个周期，选用有正常性周期的动物进入实验。 ??? 大鼠随机分成5组，每组7只。实验组按壬基酚50、100、200 mg·kg-1分为低、中、高剂量组，阴性对照组为管饲花生油，阳性对照组为乙菧酚0.2 mg·kg-1。饲养28 d，每天阴道涂片，观察动情周期，在动情期（阴道涂片示大量无核角化细胞）处死大鼠。10%水合氯醛（每100 g质量0.3 ml）腹腔注射麻醉，眶后静脉丛采血，取血清置-70 ℃冰箱待用。按液体灌注固定方法，分离出垂体、子宫、卵巢，继续固定、脱水、透明，浸蜡包埋，制成4 μm厚的石蜡切片。 ??? 1.4? E2、LH测定方法 ??? 按试剂盒操作说明，采用放射免疫法测定上述待用血清中的E2、LH水平。 ??? 1.5? 组织形态学观察及卵泡计数 ??? 上述的切片HE染色，光镜观察。取最大剖面的切片，光镜下计数具有正常卵泡结构的卵泡数（双侧卵巢的卵泡数相加），分别测定各组大鼠的初级卵泡、生长卵泡、成熟卵泡、总卵泡数。卵泡分级标准为：初级卵泡直径25 30 μm，生长卵泡直径31 400 μm，成熟卵泡直径650 700 μm［3］。 ??? 1.6? ERα的检测 ??? 按SP法（链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法）进行免疫组化染色，二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，3%过氧化氢室温孵育，微波修复抗原，羊血清封闭，37 ℃孵育15 min，滴加1∶250稀释的ERα兔抗大鼠单克隆抗体，4 ℃孵育过夜，再依次加入生物素偶联的羊抗兔IgG抗体和辣根过氧化物酶标记的链酶卵白素，各37 ℃孵育15 min，DAB染色，显微镜下控制显色，苏木素复染，常规脱水、透明、树胶封片。阴性对照以0.05 mol·L-1PBS代替一抗，得阴性结果。以人乳腺癌组织作为阳性对照，得阳性结果。根据染色面积和强度按下列方法进行半定量评分：0,无染色或微弱染色；1,染色面积＜25%；2,染色面积在25% 50%；3,50%染色面积≤75%；4,染色面积＞75%。 ??? 1.7? 统计学处理 ??? 实验数据用x-±s表示，采用SPSS 11.5统计软件，组间差异比较用独立样本的t检验，免疫组化评分结果用成组设计两样本比较的秩和检验（wilcoxon），编秩后对秩次进行t检验，检验水准α=0.05。 ??? 2? 结??? 果 ??? 2.1? 壬基酚对性周期的影响 ??? 成年雌性SD大鼠的正常性周期是