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医学论文-哮喘患者诱导痰上清液MIP ［摘要］目的:通过测定哮喘患者诱导痰上清液肺泡巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP1α)、肺泡巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、单核细胞趋化蛋白1(MCP1)的水平,探讨三者在哮喘发病中的作用。方法:轻、中度哮喘患者14例，正常人12例，用高渗盐水进行痰诱导，痰液经解粘、离心后，对沉淀细胞分类计数，使用ELISA测定诱导痰上清液中MIPlα、MIF、MCP1浓度。结果:哮喘组诱导痰嗜酸粒细胞、淋巴细胞相对计数均高于正常组（分别为7.7%±1.4%、0.7%±0.8%,P0.01;4.2%±1.0%、2.1±0.8%,P0.01），而哮喘组诱导痰肺泡巨噬细胞相对计数构成比（57.8%±3.7%）明显低于正常组(65.9%±3.6%,P001)。哮喘患者诱导痰上清液MIP1α质量浓度［（36.6±4.8）pg?ml-1］明显高于正常人［（32.6±1.7)pg?ml-1,P005］，两组诱导痰上清液MIF、MCP1浓度无显著差异。哮喘患者诱导痰上清液MIF与嗜酸粒细胞相对计数呈正相关(r=053，P005)，与肺泡巨噬细胞、淋巴细胞相对计数无相关关系；哮喘患者诱导痰上清液中MIP1α、MCP1与肺泡巨噬细胞、嗜酸粒细胞和淋巴细胞相对计数均无相关关系。结论:MIP1α可能参与哮喘的发病，嗜酸粒细胞可能通过释放MIF参与哮喘气道炎症。 　　［关键词］哮喘；诱导痰；肺泡巨噬细胞炎性蛋白1α；肺泡巨噬细胞移动抑制因子；单核细胞趋化蛋白1 　　支气管哮喘作为一种炎症性气道高反应性疾病，其发病机制复杂，至今仍未完全阐明。在哮喘发病过程中，炎症细胞、炎症介质和细胞因子相互作用，共同影响哮喘的发生和发展。研究发现，淋巴细胞、嗜酸粒细胞和肥大细胞是哮喘发病的主要炎症细胞，肺泡巨噬细胞和中性粒细胞等亦参与哮喘气道炎症；众多细胞因子形成网络，其中肺泡巨噬细胞炎性蛋白(MIP)1α，肺泡巨噬细胞移动抑制因子(MIF) 和单核细胞趋化蛋白(MCP)1亦被认为是参与哮喘发病的重要细胞因子［13］。本研究通过计数诱导痰中炎症细胞，测定诱导痰上清液MIP1α、MIF和MCP1的浓度，分析炎症细胞与细胞因子的相关性。 　　1? 对象和方法 　　11? 研究对象哮喘组：女9例，男5例，年龄（35±12）岁，病程（124±138）年，均来自南京大学医学院附属鼓楼医院呼吸科门诊及住院患者，无吸烟史，除外伴发其他支气管和肺部疾病，至少1个月内未用过糖皮质激素类药物。正常组：女4例，男8例，年龄（26±2）岁，为南京大学医学院研究生和职工，皆为健康正常人，无吸烟及过敏性疾病史。哮喘患者和健康正常人在试验前均签署知情同意书。 　　12? 主要仪器与试剂超声雾化仪(中外合资南京道芬电子有限公司)、离心机(德国Stratos公司)。双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)试剂盒(MCP1和MIF，美国BD公司；MIP1α美国Biosource公司)。 　　13? 研究方法痰液诱导前所有受试者均行肺功能检查，然后吸入沙丁胺醇200μg，10min后超声雾化吸入3％高渗盐水30~50ml 30min。雾化过程中鼓励患者咳嗽、咳痰，有痰时漱口，咳痰至硅化的玻璃烧杯中，如出现症状(喘息、严重咳嗽或呼吸困难)，则随时终止导痰。然后加入相当于痰液4倍体积的含01％二硫苏糖醇(DDT)的Hanks平衡盐溶液(HBSS)，置37℃恒温水浴箱中孵化15min，用快速液体混合器震荡15s，摇床上摇15min，用两层无菌纱布过滤，离心(1000g)10min，将上清液在-70℃冰箱保存待测，并取少许沉淀细胞涂片瑞氏染色，进行细胞分类计数。采用ELISA对诱导痰上清液中MIP1α、MIF、MCP1的浓度进行测定，试验具体步骤完全按照生物公司所推荐的路线进行。 　　14? 统计学分析采用612版本的SAS软件进行统计分析，数据以±s表示，两组间比较采用两样本t检验，相关性分析采用person相关分析。 　　2? 结果 　　21? 两组诱导痰炎症细胞相对计数构成比哮喘组诱导痰嗜酸粒细胞、淋巴细胞相对计数构成比均较正常组高(t=1139，P001;t=565，P001)，具有统计学意义。哮喘组诱导痰肺泡巨噬细胞相对计数构成比较正常组低(t=439，P001)。中性粒细胞计数在两组间无差异。见表1。 　　表1? 两组诱导痰炎症细胞相对计数构成比（略） 　　与正常组比较， 1)P001; 2）P0.05 　　22? 上清液中MIP1α、MIF、MCP1的质量浓度哮喘患者诱导痰上清液中MIP1α的浓度明显高于正常人(t=176，P005)，而哮喘患者诱导痰上清液MIF、MCPl浓度比正常人高，但无统计学意义(t=085，P005;t=128，P005)。见表2。 　　表2? 两组上清液中MI