医学论文-半夏泻心方及配伍药组含药血清抑制人胃癌BGC823细胞增殖的实验研究.docVIP

医学论文-半夏泻心方及配伍药组含药血清抑制人胃癌BGC823细胞增殖的实验研究 ?????????????????????? 作者：王萍，李娟，刘喜平，李德兴，高波 【关键词】? 半夏泻 　??? 摘? 要：目的：研究半夏泻心方及其配伍药组对体外人胃癌BGC823细胞增殖的影响 。方法：采用血清药理学方法和MTT法及台盼兰染色法观察半夏泻心方及其配伍药组对体外人胃癌BGC823细胞的敏感性及生长抑制作用。结果：辛苦组对人胃癌BGC823细胞的生长抑制作用最强，显著高于辛开组、苦降组、辛甘组、苦甘组、甘补组（P0.05）。结论：半夏泻心方中对BGC823细胞增殖起主要抑制作用的药组为辛开、苦降的配伍形式。辛开、苦降配伍后（辛苦）有显著的协同增效趋势，而其他配伍药群可能存在拮抗作用。提示辛开苦降法可能是中医药防治胃癌的治则治法之一。 　　关键词：半夏泻心方；人胃癌BGC823细胞；配伍；生长抑制 　??? 半夏泻心方为传统经方，药少力专,配伍严谨，为治疗脾胃病的代表良方，其现代研究也显示出了多方面的消化系统作用机理〔1〕。近年来本方在胃癌的防治中已有一定的临床应用〔2-4〕，但至今尚未见到该方抗肿瘤的相关基础研究。为此，我们采用血清药理学和分子生物学的方法及实验技术，紧密结合半夏泻心方所反映病机的配伍关系，对半夏泻心方及其配伍含药血清对体外人胃癌BGC823细胞的增殖进行了初步研究，以期进一步为研究半夏泻心方抗肿瘤的机制奠定基础。现报告如下。 　　1? 实验材料 　　1.1? 动物 　　家兔20只，体重2.0～2.5 kg,由兰州生物制品研究所实验动物中心提供。 　　1.2? 药物及试剂 　　半夏泻心方药材由甘肃中医学院附属医院提供，经甘肃中医学院中药鉴定教研室鉴定符合药典规定；含10 %胎牛血清的RPMI1640培养液； 0.25 %胰蛋白酶消化液；5-氟脲嘧啶（5-Fluorouracia，简称5-FU），临用时用RPMI1640培养液稀释至所需浓度。 　　2? 实验方法 　　2.1? 药物制备 　　依据原方比例〔5〕，按中医理论及配伍规律分为7组：全方组（半夏12 g、干姜9 g、黄芩9 g、黄连3 g、人参9 g、大枣4枚、甘草9 g）、辛开组（半夏12 g、干姜9 g）、苦降组（黄芩9 g、黄连3 g）、辛苦组(半夏12 g、干姜9 g、黄芩9 g、黄连3 g)、甘补组（人参9 g、大枣4枚、甘草9 g）、苦甘组（黄芩9 g、黄连3 g、人参9 g、大枣4枚、甘草9 g）、辛甘组（半夏12 g、干姜9 g、人参9 g、大枣4枚、甘草9 g）。将各组药物饮片浸泡30 min，煎煮两次，每次 30 min，纱布粗滤去渣，全方药液浓缩为含生药2 g/mL，其他配伍煎液中生药量同原方，煎法相同，煎后浓缩体积与全方煎液相同，使各配伍组中生药浓度与全方中各相应生药浓度相同。 　　2.2? 含药血清的制备 　　参照李振光等〔6〕文中的方法：每组选家兔2只，实验前禁食12 h，灌胃给药，各药物组每只家兔灌服试验药物，对照组给予相同体积的生理盐水。给药剂量：每次26 mL/kg，相当于60 kg成人日服用量的10倍；给药方式：连续灌胃3次，第1、2次间隔20 h，第2、3次间隔4 h；采血时间：第3次给药后2 h无菌条件下心脏采血。静置4 h，3000 r/min离心20 min，分离血清（药物血清，DS），同种条件下药物血清混匀，56? ℃条件下水浴30 min灭活，-20 ℃冰箱保存备用。经培养实验没有微生物生长。 　　2.3? 细胞的培养 　　BGC823细胞（人胃癌细胞株），由兰州大学细胞室引进。将BGC823细胞用含有青霉素、链霉素各100 U/mL、15 %小牛血清的RPMI1640培养液培养。在5 %CO2、37 ℃培养箱中培养2~3 d后进行传代培养。 　　2.4? MTT法测定半夏泻心方及配伍药组含药血清对BGC823细胞的敏感性 　　取对数生长期的BGC832细胞，细胞存活率达95 %以上，先用0.25 %胰蛋白酶消化培养细胞，再用含10 %胎牛血清的RPMI1640培养液配成单个细胞悬液，以每孔1×104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积200 μL。在细胞液中加入最终浓度分别为5 %、10 %的全方、辛开、苦降、辛苦、甘补、辛甘、苦甘的兔血清，各浓度设三个平行孔，并设正常兔血清对照组及5-FU阳性对照组，平行做3板，将培养板放入CO2培养箱，在37 ℃、5 %CO2及饱和湿度条件下分别培养24 h、48 h、72 h， 每孔加入MTT溶液（5 mg/mL）20 μL，37 ℃继续孵育4 h后，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液。每孔加入150 μL 二甲基亚砜（DMSO），振荡10 min，使甲充分溶解，在490