医学论文-体外诱导神经干细胞移植治疗失神经肌萎缩的实验研究.docVIP

医学论文-体外诱导神经干细胞移植治疗失神经肌萎缩的实验研究 ?????????????? ? 作者：黄新 江长青 肖颖锋 万圣祥? 【摘要】? 目的：观察维甲酸（RA）体外诱导神经干细胞后体内移植治疗失神经肌萎缩的效果。方法：共使用成年SD 大鼠28 只，切断两侧坐骨神经，随机选择一侧直接吻合坐骨神经作为对照组，实验组从孕龄15 d 的胚胎SD 大鼠脊髓组织中分离获得脊髓源性神经干细胞，经维甲酸（RA）体外诱导后，显微注射到SD 大鼠失神经支配的一侧踇长伸肌中，术后16 周神经电生理和免疫组织化学等方法观察。结果：实验组与对照组间的踇长伸肌肌肉纤颤电波幅度，神经肌纤维传导速度的数目无统计学差异（P ＞ 0.05）。结论：神经干细胞经体外诱导后体内移植具有治疗失神经肌萎缩的作用。 【关键词】? 干细胞；维甲酸；胆碱能神经元 observe the effect of induction of neural stem cells in vitro and then to preventdenervation muscular atrophy in vivo. Methods The spinal cord-derived neural stem cells of SD fetal rats afterpregnant 15 days were harvested and cultivated in serum–free medium, differentiated and induced by RA in vitro,Thenneural stem cells were random microinjected into single extensor hallucis longus of 28 SD rats which were transectedsciatic nerve ,others choosen as control groups which were repaired sciatic nerves, the two groups were examined bymuscular electrophysiological examination and cellular immunohistochemistry 16 weeks postoperatively. ResultsThe differents of the mean peak of CMAP(extent of muscle fibrillation waves) , the mean NCV（velocity of musclefiber nerve conduction）in experiment group and normal control group was not statistically significant (P 0.05).Conclusions Neural stem cells by diferentiated into cholinergic neurons induced with RA in vitro can therapydenervation muscular atrophy in vivo. ??? 〔Key Words〕 Stem cells; Retinoic acid; Cholinergic neuron ??? 失神经支配后，骨骼肌立即停止收缩，肌组织失去神经元原来的营养因子，发生萎缩、纤维化、往往再生的神经轴突尚未到达靶肌肉，运终板已经发生碎裂和崩解，导致功能无法恢复，这是外周神经损伤后治疗极为棘手的问题。神经干细胞是一群具有多向分化潜能的原始细胞，在特定的因素影响或诱导下，能向神经元、星形胶质细??和少突胶质细胞分化[1，2]。将其作为细胞移植材料对中枢神经系统疾病和外伤引起的神经元缺失具有良好效果，而且已有临床应用报道。在2006 年8 月－2008 年2 月间，我们利用在体外培养诱导的胎鼠脊髓的神经干细胞移植到SD 大鼠切断神经支配的踇长伸肌的上1/3 部，观察其在治疗失神经肌萎缩中的作用。 ??? 1 材料与方法 ??? 1.1 材料 ??? DMEM/F10（Gibco），B27(Sigma)，碱性成纤维细胞生长因子（bFGF，RD），维甲酸（Gibco），神经元无血清限定性培养基（Gibco），胎牛血清( 四季青)， 磷酸盐缓冲溶液（phosphate bufferedsolution，PBS）（Sigma）， 兔抗大鼠神经上皮干细胞蛋白(nestin) 抗体、兔抗大鼠胆碱乙酰转移酶（CHAT）抗体、兔抗大鼠神经胶质酸性蛋白（GFAP）抗体、兔抗大鼠微管相关蛋白–2（MAP2）抗体；