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医学论文-小牛椎体骨质疏松模型的快速建立 ?????????????? 作者：杨彬奎，雷伟，王军，李运明?? 【摘要】? 目的： 利用乙二胺四乙酸二钠（EDTANa2）脱钙法快速建立牛椎体骨质疏松模型. 方法： 4具新鲜小牛脊柱，每具选取第6～13节椎体，共32个椎体，采用随机区组设计方法，分成Ⅰ~Ⅷ共8个区组；采用4种处理方法： A处理组（EDTANa2脱钙3 wk），B处理组（EDTANa2脱钙2 wk），C处理组（不使用EDTANa2脱钙），D处理组（EDTANa2脱钙4 wk）. 分别检测各组椎体骨密度(BMD)后，拧入相同规格的通用性脊柱内固定系统（UPASS）椎弓根螺钉，测试其最大轴向拔出力（Fmax）及能量吸收值，同时各组取少量松质骨制成组织切片. 结果： A，B，D处理组的BMD均值，Fmax均值及能量吸收值均值都低于C处理组（P0.01），A，D处理组的BMD均值，Fmax均值及能量吸收值均值都低于B处理组（P0.01），A，D处理组之间差异无统计学意义（P0.05）. 切片显示A，D处理组骨小梁较C组骨小梁变细、数量轻度减少,间距增宽,骨髓腔扩大. 结论： 应用EDTANa2对牛椎体进行脱钙，可在较短的时间内建立用于生物力学研究的牛椎体骨质疏松模型. 【关键词】? 骨质疏松；疾病模型，动物；生物力学；EDTANa2；骨密度 　　0引言 　　由于骨质疏松造成的椎弓根螺钉松动、拔出的情况在临床工作中很常见，给脊柱外科手术带来了极大困难［1］. 如何提高椎弓根螺钉在骨质疏松患者的固定强度已成为国内外研究的热点. 本实验利用乙二胺四乙酸二钠（EDTANa2）对新鲜小牛椎体进行脱钙处理，以期为相关研究建立一种简便、快捷的实验模型. 　　1材料和方法 　　1.1材料新鲜小牛脊柱4具，每具选取第6～13椎体，8节共32个椎体，X线和骨密度检查均无明显的骨质疏松、先天性畸形、骨折和肿瘤等病变；去除软组织，分解为单个椎体并保持每个椎体的完整性. EDTANa2，NaOH(天津市化学试剂三厂)；椎弓根螺钉采用通用性脊柱内固定系统（universal poly axial spinal system, UPASS）钉（6.5 mm×40 mm）（山东威高骨科材料有限公司）；双能X线吸收骨密度（bone mineral density, BMD）仪(美国Lunar Corp公司)；拉伸试验机(AGSJ, 日本岛津公司)；leicaLA全自动研究显微镜（德国莱卡公司）. 　　1.2方法 　　1.2.1实验分组采用随机区组的设计方法. 4具新鲜小牛脊柱，每具选取第6～13节椎体共8节椎体，采用随机区组设计方法分成Ⅰ～Ⅷ共8个区组；根据随机原则，分配至4个处理组：A处理组（EDTANa2脱钙3 wk），B处理组（EDTANa2脱钙2 wk），C处理组（不使用EDTANa2脱钙），D处理组（EDTANa2脱钙4 wk）. 　　1.2.2标本脱钙处理所有椎体均用标准4.0 mm丝攻预制双侧椎弓根钉道，然后浸入40 g/L甲醛固定6 h，再取出清水冲洗、浸泡12 h. C处理组不用EDTANa2脱钙处理；A，B，D处理组用0.595 mol/L的EDTANa2脱钙液2400 mL（加入NaOH 约0.713 mol/L以调整pH值为7.0)，分别浸泡2，3和4 wk. 每日2次用20 mL注射器将浸泡椎体的0.595 mol/L EDTANa2脱钙液向每个椎弓根钉道内注射，每周更换1次脱钙液（脱钙液的浓度和量均不变）. 　　1.2.3标本检测分别于2，3 和4 wk后从脱钙液中取出A，B，D处理组，使用双能X线吸收BMD仪分别检测每个椎体的BMD；随后在每个椎体双侧拧入UPASS椎弓根螺钉，用超硬石膏垂直包埋于特制钢制容器中，采用日本岛津AGSJ系列拉伸试验机，以5 mm/min的速度轴向牵拉，直至螺钉被拉出，记录最大轴向拔出力(Fmax)及能量吸收值. 　　1.2.4组织切片观察A，B，C，D各组中分别取钉道周壁松质骨制作组织切片，leicaLA显微镜下观察. 　　统计学处理： 采用SPSS13.0 统计软件分析. 不同处理组BMD均值、Fmax均值及能量吸收值均值均采用随机区组的方差分析及Dunnettt检验进行比较，BMD与Fmax作Pearson相关分析, Microsoft Office Excel 2003软件制图表. P0.05为差异具有统计学意义. 　　2结果 　　2.1BMD, Fmax, 能量吸收值各处理组的BMD，Fmax和能量吸收值均值（表1）. 通过随机区组的方差分析，结果显示，A，B，D处理组的BMD均值、Fmax均值及能量吸收值均值都低于C处理组（P0.01），A，D