医学论文-宫颈腺癌中HPV16-18感染与COX2蛋白表达的关系.docVIP

医学论文-宫颈腺癌中HPV16/18感染与COX2蛋白表达的关系 ????????????? 作者：王喜梅, 李树平,舒筱灿，吴勇军,孙 雷,郑仁恕，湛丽 【摘要】? 　　目的 探讨16、18型人乳头瘤病毒（HPV16/18）在宫颈腺癌发生发展中的作用，分析HPV16/18感染与环氧化酶2（COX2）蛋白表达的关系。方法 采用组织微阵列技术结合原位杂交和免疫组化(SP法)检测24例慢性宫颈炎和86例宫颈腺癌HPV16/18 DNA和COX2蛋白表达情况。结果 HPV16/18 DNA和COX2蛋白在宫颈腺癌中的阳性表达率分别为65.1%与86.0%，均显著高于慢性宫颈炎组织8.3%与33.3%（P0.01）。HPV16/18感染与宫颈腺癌的病理分级和组织学类型无关，但与COX2表达呈正相关（P0.05）。COX2表达与宫颈腺癌的病理分级有关， G3组COX2蛋白阳性表达率明显高于G1组（P0.05）。COX2表达与宫颈腺癌组织学类型无明显相关性（P＞0.05）。结论 宫颈腺癌的发生与HPV16/18感染及COX2??白表达异常相关，宫颈腺癌中COX2高表达与HPV16/18感染有一定相关性，二者可能协同作用导致宫颈腺癌恶性发展。 【关键词】? 宫颈腺癌　HPV16/18　COX2　原位杂交；免疫组化 　　The Relationship between HPV16/18 Infection and COX2 Protein Expression in Cervical Adenocarcinoma ????????? Key words：Cervical adenocarcinoma;HPV16/18;COX2;In situ hybridization;Immunohistochemistry 　人乳头瘤病毒（Human papilloma virus,HPV）感染已被公认为是宫颈癌的主要病因，人宫颈癌细胞中表达的HPV瘤基因涉及宫颈上皮的转化和永生，且为增生性病变向恶性演进所必需。与宫颈肿瘤相关的HPV有20余种，其中HPV16/18在宫颈腺癌的检出率明显高于其他类型。环氧化酶2 (Cyclooxygenase2,COX2)是一种诱导型酶，可在多种因子刺激下产生，它与多种肿瘤的细胞增殖、抗细胞凋亡和肿瘤血管形成等密切相关。我们通过自制组织微阵列对24例慢性宫颈炎和86例宫颈腺癌组织进行原位杂交和免疫组化检测，探讨HPV16/18DNA与COX2蛋白表达在宫颈腺癌发生发展中的作用，分析HPV16/18感染与COX2蛋白表达的关系。 ??? 1资料与方法 ??? 1.1临床资料 ??? 选取大连市妇产医院病理科、大连医科大学病理中心及湖南省肿瘤医院病理科1999～2004年保存的宫颈腺癌石蜡标本86例，患者年龄25～72岁，平均52.1岁，全部病例均经病理专家复诊证实并按《诊断外科病理学》标准[1]进行组织学分类和病理分级。组织学类型：宫颈内膜型腺癌52例，子宫内膜样腺癌13例，透明细胞腺癌18例，浆液性乳头状腺癌3例。病理分级：G1 31例，G2 33例，G3 22例。另取24例慢性宫颈炎组织作为正常对照。所有标本经10%甲醛固定，石蜡包埋。 ??? 1.2组织微阵列制作 ??? 参照王喜梅等[2]制作方法自制组织微阵列，主要步骤：① 用自制打孔针在包埋盒内进行手工单孔制胚，根据实验标本量排成8×6孔数的长方形阵列。② 显微镜下观察HE片并在供体石蜡标本上准确圈出取材部位。③ 用自制取材针在供体蜡块上钻取深约2～3mm的组织条植入已打孔的受体蜡模，置（52±1）℃烤箱内连续烘烤2～3h，使供体组织条与受体蜡模完全融为一体，见图1。④ 将已制备好的组织微阵列连续4μm厚切片，贴片后于37℃恒温箱中放置12h，常温保存备用。 ??? 1.3原位杂交 ??? HPV16/18原位杂交检测试剂盒（含生物素标记的HPV16/18探针）购自福建泰普生物科学有限公司。杂交/检测主要步骤：切片脱蜡水化；加蛋白酶K，37℃孵育18min；梯度酒精脱水；每张切片加入10μl的生物素化探针，并盖上盖玻片；95℃变性10 min；37℃下湿盒中杂交10h；去垢剂洗涤液浸片15min去盖玻片；加SPAP结合物，37℃孵育25 min；加酶底物BCIP/NBT室温暗盒显色15 min；核固红复染；水性封片剂封片。 ??? 1.4免疫组化标记 ??? 免疫组化染色采用SP法。羊抗人COX2单克隆抗体购自北京中杉生物技术有限公司。SP免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司，染色步骤参照试剂盒说明书进行。以已知阳性片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。 ??? 1.5结果判断 ??? HPV16/18 DN