染色体与DNAPPT.ppt

2.3.3 复制的几种主要方式 (1)θ型：双向复制。大肠杆菌基因组的复制原点位于天冬酰胺合酶和ATP合酶操纵子之间，全长245bp，称为oriC。 复制的起始点涉及DNA的解旋和松开，形成两个方向相反的复制叉。前导链DNA开始复制前，复制原点的核苷酸被转录生成短RNA链，作为起始DNA复制的引物。 2.环状DNA双链的复制 (1)环状DNA双链θ型复制 复制的起始点涉及DNA的解旋和松开，形成两个方向相反的复制叉。前导链DNA开始复制前，复制原点的核苷酸被转录生成短RNA链，作为起始DNA复制的引物。 (2)滚环型：单向复制。ΦX174，DNA的合成由正链原点的专一性切割开始，所形成的5’端被从双链环中置换出来并为单链DNA结合蛋白所覆盖，使其3’－OH端在DNA聚合酶的作用下不断延伸。单链尾巴的延伸与双链DNA的绕轴旋转同步。 2.环状DNA双链的复制 (2)环状DNA双链滚环型复制 ΦX174，DNA的合成由正链原点的专一性切割开始，所形成的5’端被从双链环中置换出来并为单链DNA结合蛋白所覆盖，使其3’－OH端在DNA聚合酶的作用下不断延伸。单链尾巴的延伸与双链DNA的绕轴旋转同步。 (3)D-环：单向复制。主要是线粒体和叶绿体的环状DNA复制形式。 双链环状DNA的特殊位点开始出现一个复制泡，其中一条亲本链作为合成新链的模板，在复制泡里诱发开始合成一条新链，另外一条亲本链被前导链置换出来，前导链进一步复制将滞后链模板的特定序列置换出单链形式，开始合成滞后链的合成。 2.环状DNA双链的复制 2.4 DNA复制的特点 DNA的复制可被分为三个阶段，即复制起始、延伸和终止。 每个DNA复制的独立单元被称为复制子(replicon)，主要包括复制起始位点(Origin of replication)和终止位点(terminus)。 原核生物的整个染色体上一般只有一个复制起始位点。 2.4.1原核生物DNA复制的特点 DNA双螺旋的解开 复制的引发与终止 岗崎片段与半不连续复制 DNA聚合酶 1、DNA双螺旋的解开 DNA解链酶(DNA helicase)：在拓扑异构酶I的作用下解开负超螺旋，并与解链酶共同作用，在复制起点处解开双链。 单链结合蛋白(SSB蛋白)：保证被解链酶解开的单链在复制完成前能保持单链结构，四聚体形式存在于复制叉处，待单链复制后才掉下，重新循环。 1、DNA双螺旋的解开 DNA拓扑异构酶(DNA topoisomerase) 大多数天然状态下的DNA分子都具有适度的负超螺旋，可以形成部分单链结构，有利于蛋白质与DNA的结合。 在复制过程中，随着DNA的解旋，使正超螺旋增加，未解链部分缠绕的更加紧密，形成的压力使解链不能继续进行。拓扑异构酶可以消除解链造成的正超螺旋的堆积，消除阻碍解链继续进行的压力，使复制得以延伸。 2、复制的引发与终止 前导链：先由RNA聚合酶合成一段RNA引物，再由DNA聚合酶从RNA引物3’端开始合成新的DNA链。 滞后链：由引发体 (primosome， n,n’,n’’,Dna B,C,I)完成。先引发生成滞后链的引物RNA短链，再由DNA聚合酶III合成DNA。由RnaseH降解RNA引物，并由DNA聚合酶I将缺口补齐，最后由DNA连接酶将小片段连成大分子。 复制的引发与终止 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ全酶的结构和功能 DNA聚合酶Ⅲ 两个?亚基夹住DNA DNA聚合酶Ⅲ异二聚体 ? ? ? ? ? ? ? ? ? 延长因子 核心酶 校对 引物的结合和识别 促使核心酶二聚化 聚合酶III核心酶 聚合酶I 聚合酶III核心酶 滞后链 前导链 解螺旋酶 引物合成酶 RNA引物 引发体 拓扑异构酶II ?-夹子 ?-聚体 ?-夹子 ? -复合物 RNA引物 单链结合蛋白（SSB） 大肠杆菌复制体结构示意图 DNaA 在原点处打开双螺旋 DNaB 使DNA解旋 DNaC DNaB结合在原点所需 Hu 刺激起始 引物酶（DNaG） 合成RNA引物 SSB 结合单链DNA RNA聚合酶 促进DNaA活性 解旋酶 松驰DNA扭曲应力 E.coli复制原点起始复制所需蛋白质 E.coli复制所需蛋白质的作用 2、复制的引发与终止 复制的终止： 主要是Tus蛋白参与。当复制叉前移，遇到20bp重复性终止子序列(Ter)时，Ter－Tus复合物能阻挡复制叉的前移，等到相反方向的复制叉到达后在DNA拓扑异构酶的作用下使复制叉解体，释放子链DNA。 染色体复制的终止 oric 复制叉2 复制叉1 终止复制叉2 终止复制叉