第五章 酶工程制药工艺技术基础1.pptVIP

酶工程制药工艺技术基础 生 物 制 药 工 艺 学 主 讲 胡国勤 郑 州 大 学 化 工 学 院 第五章 酶工程制药工艺技术基础 酶工程技术 酶工程技术 酶工程是酶学与工程学相互渗透结合，发展形成的生物技术，它是从应用目的出发，研究酶和应用酶的特异催化功能，并通过工程化过程将相应原料转化成所需产物的技术。酶工程技术在工业、农业、医药、食品等领域获得广泛应用。 酶工程的主要内容包括酶的生产、分离、纯化、酶的固定化、酶与固定化酶的反应器以及酶与固定化酶的应用等。 酶的性质与特性 酶的分类与命名 酶的性质与特性 酶的结构与特性 酶的性质与特性 酶的分离、提纯及活性测定 固定化酶及其特性 固定化酶的概念和优点 固定化酶及其特性 固定化酶的制备方法 固定化酶及其特性 固定化细胞的制备方法 固定化酶的性质 酶活力的变化 固定化酶的性质 酶的稳定性 固定化酶生物反应器的主要类型 * 酶的性质与特性 固定化酶及其特性 L-天冬氨酸生产工艺 主要研究方向：（1）新酶的发现以及纯化；（2）酶和细胞的固定化技术与酶反应器；（3）基因工程与蛋白质工程技术在酶的分子设计与酶生产中的应用；（4）有机相中酶促反应的研究与应用；（5）酶的抑制剂，激活剂的开发与应用；（6）抗体酶与核酶的研究与应用；（7）模拟酶、合成酶及酶分子的人工设计、合成研究。 习惯命名法：根据底物命名或根据催化反应性质命名； 国际系统命名法及分类： 国际系统命名法：由底物及催化反应类型两部分组成，如：醇-NAD+氧化还原酶； 根据催化反应类型，将酶分成6大类（氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂合酶、异构酶、连接酶），其下再分小类，并给每个酶一系统序号，如EC1.1.1.1,第一个数字1表明这是一种氧化还原酶、第二个数字1表明作用于分子中的羟基、第三个数字1表明作用的底物是乙醇、第四个数字1则是发现的顺序号。 根据酶的组成部分不同，可分为简单蛋白质和结合蛋白质两类。 酶是生物大分子，一般由数百个氨基酸组成。 酶催化反应具有以下特点：（1）专一性强；（2）催化效率高；（3）反应条件温和；（4）酶活性的调控机制复杂。 酶的分离纯化：破碎细胞膜、抽提、纯化 酶的活力大小，可以用在一定条件下它所催化的某一化学反应的速度来表示。即测定酶的活力就是测定酶促反应的速度。 生物细胞产生的酶有两类：细胞内酶和细胞外酶。如胃蛋白酶、胰蛋白酶就是细胞外酶，氧化还原酶在线粒体上。 它在催化反应中所具有的优点：（1）酶经固定化后，稳定性有了提高；（2）可反复使用，提高了使用效率、降低了成本；（3）有一定机械强度，可进行柱式反应或分批反应，使反应连续化、自动化，适合于现代化规模的工业生产；（4）极易和产物分离。 固定化酶（immobilized enzyme）是指借助于物理和化学的方法把酶束缚在一定空间内并仍具有催化活性的酶制剂。广义的固定化酶又包括固定化酶和固定化细胞两类。 包埋法：分为凝胶包埋法及微囊化包埋法两类。 吸附法：分为物理吸附法和离子吸附法。物理吸附法的载体有氧化铝、硅胶、纤维素等；离子吸附法常用载体DEAE-葡聚糖凝胶、 CM-纤维素等。 交联法：分为交联酶法、酶与辅助蛋白交联法、吸附交联法及载体交联法。 共价键结合法： 酶的固定化方法 酶的固定化方法及其特性的比较 将细胞限制或定位于特定空间位置的方法称为细胞固定化技术，被限制或定位于特定空间位置的细胞称为固定化细胞。细胞固定化技术是酶固定化技术的发展，因此固定化细胞也称为第二代固定化酶 细胞的固定化主要适用于胞内酶，要求底物和产物容易通过细胞膜。其中以包埋法应用最为广泛。 酶固定化后活力大都下降，其原因可能是: (1)活性中心重要氨基酸与载体结合；（2）酶的空间结构变化；（3）酶与底物结合时产生空间位阻效应。 减少固定化工程中酶活力损失，反应条件要温和，此外，也可在固定化体系中加入抑制剂、底物或产物可保护酶的活性中心，如乳糖酶固定化时，在其抑制剂葡萄糖酸内酯存在下进行聚丙烯酰胺凝胶包埋，即可获得高活力固定化乳糖酶。 固定化酶稳定性包括对温度、pH、蛋白酶、变性剂及抑制剂的耐受程度。 操作稳定性 ：用半衰期表示，通常半衰期达到1个月以上时，即具有工业应用价值。 贮藏稳定性： 热稳定性： 反应器的形式分类：