沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法.docVIP

*************公司·品管部 沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法 文件编号 QS/TH-ZY-PG-401 版 本 A0 实施日期 2010年10月3日 1 主题内容与适用范围  本标准规定了冻猪肉、冻鸡肉、检验方法。适用于太合公司肉品的检验。 2 样品制备及增菌培养 2.1 肉类 2.1.1 如为冷冻产品,应在45℃以下不超过15min,或在2～5℃不超过18h解冻。若不能及时检验,应置于—15℃左右保存。非冷冻而易腐的食品,置于4℃冰箱保存。 2.1.2 以无菌操作,称取剪碎后的瘦肉样品25 g,置于灭菌均质杯内,加入25 mL,缓冲胨水增菌液,以8000～10000r/min均质1 min,移入盛有200 mL缓冲胨水增菌液的500mL广口瓶内,混合均匀,如pH低于6.6,用灭菌1mol/L氢氧化钠溶液,调pH至6.8±0.2,于37℃水浴培养4h (以增菌液达到37℃时算起),进行前增菌；其后,移取10mL转种于盛有100mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的250mL玻璃瓶内,摇匀,于42±1℃培养20±2h,进行选择性增菌。必要时,同时另称取25g剪碎的瘦肉样品,加入25mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液,同样进行均质。其后,移入盛有200mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液的500mL广口瓶内,混合均匀,如pH低于6.6, 用灭菌1mol/L氢氧化钠溶液调pH至6.8±0.2,于37℃培养24±2 h,进行直接选择性增菌。 3 分离培养 3.1 将增菌培养液摇匀,以无菌操作,用直径3mm的接种环分别挑取1环,分别划线于表面无凝结水的亚硫酸铋和胆硫乳琼脂平板各一个(必要时亚利桑那菌琼脂平板可参照使用), 于37℃培养24±2h。 3.2 观察各琼脂平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落,如无典型或可疑菌落,应再继续培养24±2h。 沙门氏菌属的菌落特征见表1。 琼脂平板 菌 落 特 征 沙 门 氏 菌 亚 利 桑 那 菌 亚硫酸铋琼脂 棕褐色或灰色至黑色,有时有金属光泽,周围培养基呈棕色或黑色, 周围培养基一般不变黑或微变黑。有些菌株呈灰绿色,带黑心 有些菌株呈灰绿色,周围培养基不 或不带黑心 变或微变暗 胆硫乳琼脂 无色半透明有黑色中心或几乎全为黑色。有些菌株无色半透明落, 乳糖阴性菌株,相似于沙门氏菌菌乳糖阳性菌株为粉红色有暗色 中心 亚利桑那菌琼脂 黄色有暗蓝色中心,周围培养基中有黄色沉淀物 粉红色有黑色中心,有时为全黑色周围培养基呈红色,被发酵卫矛醇 或庶糖的细菌包围时,菌落边缘可 为浅黄色 4 鉴定 4.1 筛选试验 4.1.1 每个琼脂平板至少应挑选2个典型或可疑菌落,分别用接种针接种赖氨酸脱羧酶培养基或尿素酶琼管,接种后无须灭菌接种针,直接再接种三糖铁琼脂一管于37℃培养 24±2h。 4.1.2 挑取菌落后的琼脂平板,应置于4～8℃至少保留24 h,以备必要时复查。 4.1.3 按表2或表3结果进行判断。 表1-三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶培养基筛选 三糖铁琼脂 赖氨酸 脱羧酶 初步判断 叙面 底层 产气 硫化氢 K A +（-） +（-） + 可疑沙门氏菌属 KJ A +（-） +（-） - 可疑沙门氏菌属 A A +（-） +（-） - 非沙门氏菌属 K K +（-） +（-） +/- 非沙门氏菌属 注： K—产碱 A—产酸 +—阳性反应 -—阴性反应 +/-—阳性或阴 表2-糖铁琼脂和尿素酶琼脂筛选 三糖铁琼脂 尿素酶琼脂 初步判断 叙面 底层 产气 硫化氨 K A +（-） +（-） - 可疑沙门氏菌属 K A +（-） +（-） + 非沙门氏菌属 A A +（-） +（-） + 非沙门氏菌属 K K +/- +/- +/- 非沙门氏菌属 注： K—产碱 A—产酸 +—阳性反应 -—阴性反应 +/-—阳性或阴 4.2 生化试验 4.2.1 将符合表2或表3可疑沙门氏菌属特性的三糖铁琼脂培养物,按表4进行生化试验 (表中赖氨酸脱羧酶试验或尿素酶试验的结果见4.1结果,不再另做)。 表4 沙门氏菌属生化反应 序 号 生 化 项 目 反 应 沙门氏菌 亚利桑那菌 1 尿素酶试验 - - 2 V-P试验 - - 3 赖氨酸脱羧酶试验 + + 4 吲哚试验 - - 5 丙二酸钠试验 - + 6 卫矛醇试验 d - 7 硝酸盐还原 + + 注: ＋—阳性反应；－—阴性反应；d—反应不定。 4.2.2 所有生化试验管均于37℃培养24±2 h。 4.2.3 生化试验结果符合表4沙门氏菌属特性的按4.3进行。 4.3 血清学试验 4.3.1 检查培养物有无自凝性 在洁净的玻片上加一滴生理盐水,将待试培养物混合于