甘蓝型油菜BnGPX1克隆和非生物胁迫下的表达精选.pdfVIP

2011年 8月 中国油料作物学报 2011，33(4)：331—337 Chinesejournalofoilcropsciences 甘蓝型油菜谷胱甘肽过氧化物酶基因 克隆和非生物胁迫下的表达 胡茂龙，龙卫华，高建芹，陈新军，张洁夫，陈 松，戚存扣，浦惠明 (江苏省农业科学院经济作物研究所，国家油料作物改良中心南京分中心，江苏 南京210014) 摘要：利用 RT—PCR(reversetranscriptionPCR)技术从甘蓝型油菜宁油 16号 (BrassicanapusL．)中克隆了一 个非生物胁迫下细胞抵御活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)伤害的关键酶 GPX(谷胱甘肽过氧化物酶)基因，命 名为BnGPX1(GenBank登录号 ：HM130680)。BnGPX1的开放阅读框长度为711bp，推测编码蛋 白含有236个氨基 酸，分子量为26．10kD，等电点为9．37。BnGPX1酶具有GPX特有的3个结构域及半胱氨酸残基。通过PCR方法 克隆得到BnGPX1基因组序列(GenBank登录号：HM130681)。该序列与拟南芥AtGPX1基因相似，由6个外显子和 5个内含子组成，内含子的剪切位点符合真核生物GT—AG规则。半定量 RT—PCR发现BnGPX1在油菜茎、叶、角 果和花中表达量高，根中表达量较低。在盐、干旱和高温胁迫下BnGPX1表达量升高，出现峰值的时间不同。该基 因对低温胁迫没有响应。 关键词：甘蓝型油菜 ；谷胱甘肽过氧化物酶；表达；非生物胁迫 中图分类号：Q781，$565．4 文献标识码：A 文章编号：1007—9084(2011)04—0331—07 GlutathioneperoxidasegeneBnGPX1cloningfrom rapeseedand expressionunderabioticstress HUMao—long，LONGWei—hua，GAOJian—qin，CHENXin—jan， ZHANGJie—fu，CHENSong，QICun—kou，PuHui—ming (InstituteofIndustrialCrops，JiangsuAcademyofAgriculturalSciences， NanjingSub—center，NationalCenterofOilCropsImprovement，Nanjing210014，China) Abstract：Aglutathioneperoxidasesgene，designatedasBnGPX1(GenBankassessionnumberHMI30680)， wasakeyenzymeprotectingplantsagainstoxidativedamagegeneratedbyreactiveoxygenspecies(ROS)under abioticstresses．ItwasclonedrfomrapeseedcuhivarNingyou16(BrassicanapusL．)byRT—PCR (reversetran— scriptionPCR)．Theopenreadingframe(ORF)ofBnGPX1was711bp，encoding236aminoacidswithisoelec— tricpoint(pI)of9．37andmolecularmassof26．10kD．BnGPX1had3characteristicdomainsofplantGPXsand 3conservedcysteineresidues．ItsgenomicDNA (gDNA)rfagment(GenBankassessionnumberHM130681)was isolatedbyPCR．ThesequenceofgDNA demonstrated6exonsseparatedby5introns．Allintronsweresplicedfol— lowingtheconsensussequencewithGTandAGat5’and