农杆菌介导的紫穗槐茎段愈伤组织遗传转化研究 Genetic Transformation through Stem Segments-Derived Callus of Amorpha fruticosa by Agrobacterium Tumefaciens.pdfVIP

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2018-01-30 发布于上海
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农杆菌介导的紫穗槐茎段愈伤组织遗传转化研究 Genetic Transformation through Stem Segments-Derived Callus of Amorpha fruticosa by Agrobacterium Tumefaciens

吉林农业大学学报2010，32(6)：644—649 http：I／xuebao．血u．edu．en Jilin Journal AgriculturalUniversity of 农杆菌介导的紫穗槐茎段愈伤组织遗传转化研管清杰，柳参奎” 东北林业大学盐碱地生物资源环境研究中心，哈尔滨150040 摘要：采用农杆菌介导法对紫穗槐茎段诱导的愈伤组织进行遗传转化研究。确定了卡那霉素临界耐受浓度为40 rain时转化效 mg／L。菌液浓度与侵染时闻的正交试验结果表明：侵染菌液0D锄为0．8、侵染时间为30 率最高，达17．95％。GUS染色检测分析表明：含pBll21．GUS质粒DNA农杆菌侵染转化的愈伤组织其抗性不定芽和再生植株根和叶均呈蓝色。转化植株叶PeR检测结果表明外源GUS基因已整合到紫穗槐基因组中。以上结果表明建立了以茎段诱导愈伤组织为转化受体、农杆菌介导的紫穗槐高效遗传转化体系。为了验证其 rim蓝光源激发下可重复性，又进行了pBll21．GFP基因的转化，Tn代再生植株PeR检测整合率达85％，在488 转化株的顶芽产生绿色荧光。说明转入的基因在35S启动子下过量表达。此遗传转化体系可应用于转基因育种。关键词：紫穗槐；农杆菌；茎段；愈伤组织；遗传转化中图分类号：$793．2 文献标识码：A 文章编号：1000．5684(2010)106一0644．06 GeneticTransformationStem Callusof through Segments-Derived Tumefacieus AmorphafruticosabyAgrobacterium GUAN Shen-kui Qing-jie．LIU AlkaliSoilNaturalEnvironmentalScience Center，NortheastForestry 150040，China University，Harbin Abstract：Genetictransformationwasdonetoinducecallusinstem of L．via segmentAmorphafruticosa that tumefaciens—mediatedtransfer．ItWasfound criticaltoleranceconcentrationof Agrobacterium gene was40 of bacteriumconcentrationandinfectiontime Kanamycinms／L：Theexperimentorthogonal infectionconcentrationof conversion showedthat 0．6—0．8，．and bacterium(OD600)Was efficiency 17．95％wheninfectiontimeWas30min．TheDNA